Реакции лимфоцитов на механические и осмотические воздействия при водной депривации
Реакции лимфоцитов на механические и осмотические
воздействия при водной депривации
М.З.Федорова, В.Н. Левин
Критериями,
характеризующими состояние белых клеток крови являются показатели их
функциональной активности и сопротивляемости различным факторам. Причем,
последнее свойство часто бывает более информативным показателем, т.к. угнетение
функций может происходить при далеко зашедшей деструкции клеток, имеющей
необратимый характер [ 1] . Особенно важное значение это положение имеет при
анализе механизмов адаптации организма к экстремальным факторам среды.
Целью
проведенного исследования было изучение реакций лейкоцитов на механические и
осмотические воздействия в условиях дегидратации организма.
МЕТОДИКА
Опыты
проведены на 48 беспородных белых крысах-самцах массой 370-420 г. Животных
экспериментальных групп лишали воды при свободном доступе к сухому корму [ 4] .
Оценку осмотической стойкости, осморегуляторных и деформационных реакций вели
на 3, 6 и 10 сутки безводного содержания. Контролем служили интактные животные.
Для
исследований использовали суспензию лейкоцитов в изотоническом забуференном
растворе (раствор Дюльбекко), состоящую на 95-98% из лимфоцитов. Осмотическую
стойкость, регуляторные возможности и мембранный резерв изучали, используя
комплексный метод, подробно описанный ранее [ 6] . Суть метода сводится к
следующему. Лейкоциты помещали в растворы хлорида натрия разной концентрации
(0,9%; 0,45%; 0,2%). Время экспозиции в гипотонических растворах составляло 60
с и 1 ч. Данные по изменению морфометрических параметров клеток после инкубации
в 0,45% растворе использовали для оценки регуляторных возможностей. Мембранный
резерв определяли по изменениям площади поверхности лейкоцитов после
60-секундной инкубации в 0,2% растворе хлорида натрия. Расчеты объема и площади
поверхности по стандартным формулам для шаровидных тел вели на основе измерения
диаметра 50-60 клеток, фиксированных глутаровым альдегидом, помещенных на
предметное стекло и окрашенных азур-эозином. Осмотичскую стойкость выражали
числом (%) клеток сохранившихся после часовой экспозиции в 0,2% растворе
хлорида натрия.
Для
оценки деформационных свойств за основу была взята методика Tran-Son-Tay R. с
соавт. [ 7] . Капилляры, диаметром 4 мкм заполняли изоосмотическим буфером и
соединяли с манометром. Перемещение клеток к капилляру и в капилляре
обеспечивалось постоянным во всех опытах отрицательным давлением (100 мм рт.
ст.). Все манипуляции проводили в микрокапилляре на предметном столике
микроскопа. Для наблюдений и замеров использовали объектив 40 ВИ и
окуляр-микрометр МОВ-1-15* . После регистрации для каждой клетки первичных
параметров (диаметр лейкоцитов в исходном состоянии, длина и ширина
деформированной клетки, время восстановления до исходной формы) рассчитывали
площадь поверхности и объем покоящихся и деформированных лейкоцитов. Для
каждого животного было обсчитано 40-60 клеток.
Все
полученные данные обработаны статистически. Достоверность различий опрделялась
по критерию t Стьюдента.
Результаты исследования
Проведенное
исследование показало, что к 3-м суткам дегидратации происходило существенное
уменьшение размеров лейкоцитов крови. В дальнейшем (6-10 сутки) за счет
включения регуляторных механизмов клеточный объем восстанавливался до уровня
интактных животных (табл. 1).
Умеренная
гипоосмотическая нагрузка (60 с в 0,45% растворе хлорида натрия) приводила к
достоверному увеличению объема лимфоцитов у контрольных животных, а также на 6
и 10-е сутки безводного содержания (18¸ 32%, р< 0,01). На 3 сутки
дегидратации объемные изменения были незначительны (12%, р > 0,05). Высокий
осмотический градиент (60 с в 0,2% растворе хлорида натрия) вызывал достоверное
увеличение размеров клеток у всех животных (табл. 1). Однако, в контрольной
группе изменения объема лимфоцитов были значительно больше, чем в
экспериментальных (54% против 19¸ 32%, р< 0,01). Увеличение площади
поверхности в этих условиях составляло: контрольная группа - 33%, 3 сутки дегидратации
- 12%, 6 и 10 сутки - 20%. Т.е. мембранный резерв эффективнее использовался
лейкоцитами интактных животных.
Таблица
1
Размеры
лимфоцитов, инкубированных в растворах хлорида натрия разной осмолярности
Похожие работы на - Реакции лимфоцитов на механические и осмотические воздействия при водной депривации
|