С споры этих грибов не прорастают. [ к.х.н. Таутова Е.Н., к.х.н. Хамитова А.С., Гулевская Е.Г.]
1.3 Методы определения афлатоксинов в продуктах животноводства
С возникновением проблемы афлатоксикозов были разработаны методы выделения и идентификации афлатоксинов из различных продуктов, кормов и тканей организма.
Метод обнаружения афлатоксинов в зерне и продуктах его переработки был разработан А.Н. Леоновым (1973). Сотрудниками института питания были разработаны методические рекомендации по определению афлатоксинов в пищевых продуктах растительного происхождения, в молоке и молочных продуктах. Все эти методы основаны по принципу тонкослойной хромотографии с предварительной колоночно-хроматографической очисткой.
Система контроля пищевых продуктов животноводства по загрязнению микотоксинами включает три основных этапа:
Отбор проб для анализа.
Лабораторное исследование.
Обработка результатов исследования.
Отбор проб продуктов на микологический анализ должен проводиться в соответствии с ГОСТ 12430 «Сельскохозяйственная продукция. Методы отбора образцов при карантинном досмотре и экспертизе».
Учитывая, что продуценты микотоксинов могут поражать пищевые продукты на любом этапе их производства, отбор проб для анализа следует производить на различных этапах: перед сбором урожая, в процессе хранения, технологической обработки, перед реализацией для питания населению.
Лабораторный анализ предполагает использование следующих методов исследования: микологического, химического и токсико-биологического. Применение указанных методов позволяет наиболее полно характеризовать санитарное состояние продукта.
Количественные аналитические методы определения микотоксинов могут быть подразделены на физико-химические, радиоиммунохимические и иммуноферментные. Все физико-химические методы определения афлатоксинов основаны на их способности сильно флюоресцировать при воздействии длинноволнового ультрафиолетового излучения.
Эти методы в настоящее время являются наиболее распространенными и включают последовательные стадии выделения и особенно количественного определения микотоксинов. Стадия выделения состоит из двух этапов: экстракция - отделение микотоксина от субстрата и очистка - отделение микотоксина от соединений с близкими физико-химическими характеристиками. Окончательное разделение микотоксинов осуществляют с помощью одно- и двумерной тонкослойной хромотографии (ТСХ) с применением пластинок «Силуфол».
В настоящее время разработан ряд отечественных и зарубежных методов по определению афлатоксинов в кормах, пищевых продуктах растительного и животного происхождения. Немецкими исследователями предложен метод определения афлатоксинов в тканях животных, получавших корма, загрязненные афлатоксинами.
Метод основан на экстрагировании токсинов метанолом с последующей очисткой на хроматографической колонке. Способ определения афлатоксинов в биологических материалах описан чехословацкими авторами, где экстрагирование также производят метанолом, очистку петролейным эфиром и переэкстрагирование - хлороформом.
Описана новая методика для анализа афлатоксинов (В1, В2, G1, G2, М1) в сырых материалах, кормах для сельскохозяйственных животных и продуктах питания человека, основанная на иммуноферментном принципе. Набор для анализа афлатоксинов выпускается французской фирмой Тransia.
Анализ основан на использовании моноклинальных антител, связанных с пероксидазой. После образования комплексов антиген-антитело о количестве присутствующих в пробе антигенов (афлатоксины) судят по интенсивности развивающейся окраски. Анализ может быть выполнен как в качественном, так и в количественном вариантах. Минимальная концентрация афлатоксинов в пробе составляет около 5 ч/млрд. В сравнении с распространенными ныне методами анализа афлатоксинов посредством тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хромотографии разработанная методика быстрее, проще в работе, дешевле, дает более воспроизводимые результаты.
Авторами обсуждаются возможности применения разработанного способа для анализа содержания афлатоксина В1 в кормах для сельскохозяйственных животных и продуктах питания человека.
Таким образом, из вышеприведенного анализа существующих методов обнаружения и идентификации афлатоксинов наиболее подходящим и доступным в практических условиях является метод ТСХ. В этих методах, основанных на принципе тонкослойной хроматографии, при экстрагировании афлатоксинов из образца применяют метиловый спирт СН3 ОН. [14]
.4 Диагноз
Диагноз ставят, учитывая данные анамнеза и клиническую картину, эпизоотические сведения и результаты вскрытия павших или вынужденно убитых животных и птицы. Окончательный диагноз ставят на основании комплекса лабораторных исследований: органолептический и микроскопический анализы пораженных кормов; токсикологическое исследование подозрительных кормов (включая биопробы); микологический анализ пораженных кормов с выделением чистых культур гриба и определением его токсичности на лабораторных животных. [4]
Средние пробы подозрительных кормов высевают в бактериологические чашки на агар Чапека и на фильтровальную бумагу, увлажненную стерильной водой, помещают в термостат и выдерживаю при 25-370С в течение 3-4 суток. При появлении колоний гриба их отсевают в пробирки с той же средой для получения чистой культуры, из которой готовят культуральную жидкость. Затем ставят биологическую пробу для проверки гриба на токсичность путем подкожного введения жидкости белым мышам и кожной пробы на кролике. У белых мышей может нарушиться координация движений, появиться очень сильные судороги со смертельным исходом. У кролика в области паха тщательно выбривают поверхность кожи и наносят культуральную жидкость. Положительная реакция характеризуется утолщением кожи, гиперемией, болезненностью, а через несколько дней - некрозом. При слабой токсичности грибов у подопытных животных может быть отрицательная реакция и на коже не будет каких-либо изменений. Мясо и конфискаты от вынужденно убитых животных подвергают проверке. Мясо идет на производство колбасных изделий. [4]
.5 Течение,клинические признаки, патологоанатомические изменения
Однако в практических условиях острые интоксикации встречаются очень редко. У лошадей наблюдается колики, в крови нейтрофильный лейкоцитоз.
Подострое и хроническое течение болезни характеризуется:
депрессивным состоянием;
переменчивым аппетитом;
парезами конечностей;
запорами. [4]
При поедании животными кормов, пораженных токсинами, ядовитые вещества поступают через стенки пищеварительного аппарата в кровеносные и лимфатические сосуды и с током крови и лимфы разносятся по организму, проникая во все органы и ткани, в том числе и в центральную нервную систему.
Общее действие токсических метаболитов проявляется после их поступления в кровь и лимфу и воздействия на ткани, органы и целые системы. Здесь они вызывают различные патологические процессы:
геморрагический диатез;
нарушение функций органов пищеварения;
дистрофические и язвенно-некротические процессы на слизистых оболочках желудочно-кишечного тракта, печени, почек, сердечнососудистой системы.
В результате этого нарушается:
общий и частный обмены веществ (белковый, углеводный, жировой, минеральный и водный);
нарушается дисбаланс витаминов и микроэлементов в организме;
снижается общая реактивность организма.
Врожденные и приобретенные защитные силы организма уже не могут противостоять развитию болезни. Из кишечника и внешней среды внедряется банальная микрофлора, которая отягощает микотоксикозы бактериемией, септикопиемией и даже общим заражением крови. [4]
На вскрытии отмечают увеличение печени и ее жировую дегенерацию, некроз печеночных клеток, переполнение желчного пузыря, точечные кровоизлияния в печени, сердце, легких, слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта.
Гистологические изменения характеризуются пролиферацией желчных протоков, дегенерацией центролобулярных гепатоцитов, полной или частичной облитерацией фиброзной ткани многих центральных вен. [28].
1.6 Ветеринарно-санитарные мероприятия
Эффективных специфических средств профилактики и лечения до сих пор не разработано. А так лечение можно разбить на несколько этапов:
немедленное прекращение скармливания кормов, пораженных токсическими штаммами грибов;
срочное удаление из организмов продуктов метаболизма токсических штаммов грибов;
предотвращение всасывания токсических метаболитов из кишечника в кровь;
организация лечебных мероприятий в последующий после критического состояния период. [4]
Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя животных и при афлатоксикозе
Ветеринарно-санитарная и оценка продуктов убоя животных, здоровых и больных афлатоксикозом, проводится согласно правилам ветсанэкспертизы.
При кормлении животных разнотравьем, зерном и концентрированными кормами, зараженными аспергиллами, мясо и внутренние органы приобретают токсические свойства, что должно определять порядок их дальнейшего использования. По биохимической структуре афлатоксин В1 - самый токсичный. Около 80% всей суммы афлатоксинов приходится на токсин В1.
В случаях вынужденного убоя животных при остром и подостром афлатоксикозе внутренние органы необходимо направлять на изготовление сухих животных кормов и в корм зверям, а тушу используют по результатам лабораторного анализа. В случае обнаружения сальмонелл или других возбудителей токсикоинфекций мясо подвергают обезвреживанию проваркой. При отрицательных результатах микробиологических исследований на сальмонеллы тушу направляют на выработку колбасных или консервных изделий. Шкуру выпускают без ограничений. Кровь и эндокринно-ферментное сырье для медицинских целей не собирают. Мясо и субпродукты для детского питания не используют.
При хронических афлатоксикозах, сопровождающихся дистрофическими изменениями во внутренних органах и в скелетной мускулатуре, все продукты убоя, кроме шкур, направляют на техническую утилизацию. Шкуры выпускают без ограничения.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
.1 Цели и задачи собственных исследований
Целью данных исследований является изучение ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и органов животных при микотоксикозах (афлатоксикозах).
Основные задачи:
определить качественные показатели, пищевую ценность мяса и органов животных при афлатоксикозе;
провести ветеринарно-санитарную экспертизу мяса и животных при афлатоксикозах;
сравнить качество мясо здоровых и больных животных.
.2 Материалы и методы исследований
Лабораторные исследования проведены в Республиканской ветеринарно-испытательной лаборатории г. Якутска и на кафедре акушерства, патанатомии и ветеринарно-санитарной экспертизы Якутской Государственной Сельскохозяйственной Академии, в Хангаласской ветеринарно-испытательной лаборатории Республики Саха (Якутии).
Отборы проб и исследуемый растительный материал были взяты на территории Якутии и в Центральной зоне - в Хангаласском улусе.
Материалом исследования служили мясо и органы лошадей. Для обнаружения афлатоксинов служили образцы кормовых растений (разнотравно-злаковые, злаково-осоковые).
При микологических исследованиях кормов использовали «Методы исследования в ветеринарной медицине» [9], «Лабораторную диагностику микотоксикозов» [31], «Определитель патогенных и условно- патогенных грибов» [23].
Концентрацию афлатоксинов в кормах определяли методом двумерной тонкослойной хромотографии с применением пластинок «Силуфол».
.3 Определение свежести мяса и качества жира
Органолептические исследования мяса якутских лошадей и северных оленей проводили после созревания при температуре 0-4°С в течение 48 часов.
Отбор проб и органолептические исследования мяса и внутренних органов проводили в соответствии с требованиями ГОСТ 9959-91, 7269-79 «Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести» и согласно «Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1988).
Для физико-химического исследования использованы методы, рекомендованные ГОСТ 23392-78, 77021-74, 23042-86.
Для определения значения рН мяса готовили водную вытяжку из тазобедренных мышц в соотношении 1:4, замеры проводили при помощи потенциометра рН- 340. Величина рН указывает не только на свежесть мяса, но и на нарушение гликолиза, который протекает замедленно после интоксикации у животных.
Для определения активности фермента пероксидазы готовили водную вытяжку из тазобедренных мышц в соотношении 1:4. В пробирку переносили 2 мл отфильтрованного экстракта и добавляли последовательно 5 капель 0,2% спиртового раствора бензидина и 2 капли 1% раствора перекиси водорода.
Количество аминоаммиачного азота определяли в 10 мл фильтрата титрованием 0,1 N-раствором едкого натрия по методике Сафронова А.М. (1996).
Определение первичного распада белков в бульоне проводили в
мл фильтрата с добавлением 5% раствора сернокислой меди.
Определяли перекисное и кислотное число. Брали внутренний жир и исследовали для выявления воздействия препарата на показатели его доброкачественности. Исследования проводили в соответствии с ГОСТ 8285-91.
Перекисное число определяли следующим образом: навеску около 0,8 г вытопленного жира помещали в коническую стеклянную колбу с притертой пробкой, растворяли в смеси, состоящей из 10 мл ледяной уксусной кислоты и 10 мл хлороформа. К раствору добавляли 0,5 мл насыщенного раствора йодистого калия и выдерживали в темном месте в течении 3 минут. Затем добавляли 100 мл дистиллированной воды, в которую заранее был добавлен 1 мл 1% раствора крахмала. Раствор приобретал синюю окраску, и выделившийся йод оттитровывали 0,01N раствором тиосульфата натрия до исчезновения синей окраски. Определение вели в двух параллельных опытах, т.е. ставили еще контрольный опыт, в котором брали те же химические расчеты, но без жира. При этом учитывали количество миллилитров тиосульфата натрия, использованного на титрование двух параллельных опытов. Перекисное число (х) в процентах йода вычисляли по формуле:
(Y-Y)*K* 0,00127* 100
Х= m
- объем 0,01 N раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование йода, выделившегося в основном опыте, мл;- объем 0,01 N раствора тиосульфата натрия, израсходованного на титрование йода, выделившегося в контрольном опыте, мл;- навеска жира, г;
К - коэффициент поправки к раствору тиосульфата натрия для пересчета на точный 0,01 N раствор;
,00127 - количество граммов йода, эквивалентное 1 мл 0,01 N раствора тиосульфата натрия.
Исследования кислотного числа проводили в следующем порядке: к 1 г расплавленного жира, прибавляли 50 мл нейтрализованной эфирно-спиртовой смеси и 3 капли 1% спиртового раствора фенолфталеина. Содержимое тщательно перемешивали. Полученный раствор при постоянном взбалтывании быстро титровали 0,1 N водным раствором гидроокиси натрия до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 минуты. В случае помутнения жидкости добавляли в колбу 5 мл нейтральной смеси, взбалтывая содержимое колбы. Если просветление не наступало, то колбу нагревали на водяной бане, охлаждали до комнатной температуры и продолжали титрование. Учитывали количество гидроокиси натрия. Кислотное число (х) в мг на 1 г жира вычисляли по формуле:
*K*5,61 Х= m
где Y - объем O,1N раствора гидроокиси натрия, израсходованное на
титрование йода, мл;
К - поправка к щелочи для пересчета на точный 0,1 N раствор;
,61 - количество мл гидроокиси натрия, содержащегося в 1 мл О,1 N раствора гидроокиси натрия.
.4 Исследование санитарно-микробиологических показателей продуктов убоя лошади при афлатоксикозе
Для изучения обсемененности продуктов убоя лошадей при афлатоксикозе, провели микробиологические исследования мышечной ткани и внутренних органов. Определяли наличие возбудителей (Aspergillus flaws) токсинообразующих грибов- продуцентов афлатоксинов, эшерихий, клостридий и стрептококков.
При отборе и бактериологическом исследовании материала руководствовались:
ГОСТ 21237-75, 77022-74 «Мясо. Методы бактериологического анализа. Подготовка проб для бактериологического исследования»;
ГОСТ 10444.9.-88 «Продукты пищевые. Методы определения Cl.perfringens»;
ГОСТ 10444.2.-94 « Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества St.aureus»;
ГОСТ 10444.12-88 «Продукты пищевые.
Отобранные пробы мышечной ткани освобождали от пленок и соединительной ткани и погружали в спирт на 3-5 минут, затем обжигали над пламенем горелки.
Из внутренней их части стерильно вырезали кусочки для посева. Посевы культивировали при 37С° в течении 18 -24 часов и в зависимости от характера роста на питательных средах проводили исследование на наличие определенных микробов. Из проб предварительно делали мазки - отпечатки, окрашивали по Граму и микроскопировали. Параллельно с исследованием мазков с соблюдением всех правил производили посев каждой отдельной пробы материала на селективные и дифференциальные среды для выделения E.coli, Cl.perfrmgens и St.aureus.
Определение кишечной палочки. Из колоний, характерных для бактерий кишечной палочки, выросших на элективных средах, приготавливают мазки, окрашивали по Грамму и микроскопировали.
Определение анаэробных микробов. При выделении чистых культур анаэробов придерживались I варианта схем, предложенных Ф.И. Каган и Я.Р. Коваленко. После ориентировочной микроскопии культур, выросших на средах Китт-Тароцци, производили их высев на кровяной сахарный агар Цейсслера. Посевы на агаре помещенные в анаэростаты термостатировали при 37°С 24 часа, затем при наличии роста производили изучение выросших культур микроскопию мазков из колоний, с последующим отвивом отдельных подозрительных колоний в пробирки на аэробные среды. Для дальнейшего изучения, выделенные культуры анаэробов пересевали на различные дифференциальные питательные среды в том числе и на пестрый ряд.
3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
.1 Симптоматика якутских лошадей при афлатоксикозе
Клиническое течение афлатоксикоза у лошадей якутской породы изучаются в естественных условиях. В эксперименте по изучению клинической картины мной было исследовано 1 туша лошади, болезь которая протекала в подостром течении в Хангаласском улусе. И показатели больной лошади сравнила со здоровой.
Предубойную диагностику афлатоксикоза проводят комплексно, с учетом анализа кормления, клинического проявления болезни, данных патологоанатомического вскрытия. Подтверждают диагноз микотоксикологическим исследованием кормов.
Заболевание может протекать остро, подостро и хронически. Токсическое действие афлатоксинов в значительной степени зависит от возраста и пола животных.
Наблюдение за состоянием лошадей в разные сезоны года проводят в стационарных изгородях, построенных около водоема, в удобном, хорошо защищенном от ветра месте. Уход за животным и его содержание было удовлетворительной.
Общее состояние здоровой лошади не изменялось. Температура тела на протяжении опыта была в пределах 37,5-38,5°С, частота пульсовых ударов в минуту 42-80, все клинические показатели соответствовали параметрам здоровых животных.
При остром течении отмечаются выраженные нервные расстройства: возбуждение, мышечная дрожь, неуверенная походка, снижение аппетита, атаксия, судороги.
У больной лошади был афлатоксикоз при подостром течении. Аппетит отсутствует, животное стоит с опущенной головой. Клиническая картина при хроническом течении проявляется вялостью, задержкой роста, истощением, снижением продуктивности. Температура тела была повышена до 39,0°С, но у некоторых больных животных температура тела сохраняется в пределах нормы.
При афлатоксикозе клинические признаки связаны с поражением печени, что необходимо учитывать при дифференциальной диагностике других микотоксикозов.
.2 Мясная продуктивность якутской лошади при афлатоксикозе
Мясная продуктивность лошадей зависит от различных факторов: от породы, возраста, пола, сезона года, упитанности и физиологического состояния. Отклонение от нормы может быть следствием вредного воздействия окружающей среды, недостаточности кормов или их низкого качества, заболеваемости животных.
Афлатоксины вызывают тяжелые острые отравления у животных и влияют на выход продуктов убоя, морфологический состав, что, в свою очередь, снижает продуктивность, а в малых дозах поступление микотоксина не приводит к заметным отклонениям в физиологическом состоянии, но вызывает значительные снижения при росте массы тела, ослабление резистентности организма [45].
Нами были проведены исследования туши полученного от вынужденного убоя средней упитанности при подостром течении афлатоксикоза, и сравнение с показателями здоровой лошади. Мясная продуктивность больной лошади была ниже, чем у здоровых.
Так, при острой форме афлатоксикоза и средней упитанности у взрослого поголовья убойный выход на 9,65% и на 13,46%, в подострой форме на 11,36% и 15,57% больше, чем у больных. При хронической форме афлатоксикоза, нижесредней упитанности - также выше на 15,34% и 16,73% по сравнению с показателями у больных животных (табл. 2.).
Показатели здоровых животных, показывают, что мясо, полученное от убоя здоровых лошадей, в отличие от больного, имеет значительный убойный выход.
Дальнейшие исследования показали, что морфологический состав туши лошади средней упитанности при остром течении болезни существенно отличается от морфологического состава туш здоровых животных.
В результате можно сделать вывод, что вынужденно убитые лошади, больные афлатоксикозом, отличаются низкой живой массой, в результате уменьшается масса туши с низким процентом убойного выхода.
Изучение живой массы, массы туши и убойного выхода лошадей позволило установить изменчивость величины этих признаков в зависимости от течения болезни, возраста, упитанности и физиологического состояния.
Таблица 1
Живая масса, масса туш и убойный выход якутских лошадей при афлатоксикозе
Группы Течение болезни и катерогии упитанностиКол-во головЖивая масса, кгМасса туш, кгУбойный выход, %взрослыеОстрое средняя упитанность303,5 145,0 47,7Подострое средняя упитанность296,0 138,8 46,8Хроническое ниже средняя 1 279,0 124,7 44,7Здоровые средняя упитанность1 329,0 173,7 52,8
3.3 Обнаружение афлатоксина В1 в продуктах убоя якутских лошадей (в мясе, печени, почках)
С целью решения вопроса об использовании мяса при афлатоксикозе были проведены исследования мяса лошади больного афлатоксикозом на содержание афлатоксина. Концентрация афлатоксина В1 в мышечной ткани 3,10±0,34 мкг/г.
Устоявшийся на протяжении многих лет отъем молодняка от матерей по технологии ведения коневодства, проводят в конце октября - начале ноября. В этот промежуток времени в коневодческих хозяйствах концентрируется большое поголовье лошадей разных возрастов. С наступлением холодов и перепадов температуры воздуха, вследствие неполноценного кормления у молодняка возникают стрессы, способствующие снижению иммунитета. В это время в естественных условиях широко применяется подкормка лошадей, где используют зерно (овес, ячмень, зернофураж); сено и концентрированные корма.
Существует два вида подкормки: целевая (профилактическая) и вынужденная, являющаяся мерой сохранения лошадей при неблагоприятных природно-климатических условиях Якутии.
Отравления, наблюдающиеся в практике, происходят из-за кормления животных недоброкачественными кормами, пораженными афлатоксином, и поэтому чрезвычайно важным вопросом является своевременная заготовка и сохранение кормов в летне-осенний период, и изучение продуктов убоя якутских лошадей на накопление афлатоксинов является достаточно реальным. Чаще всего в это время наблюдаются случаи поражения афлатоксином В1 продуктов убоя.
Нами было исследовано 3 пробы мяса, печени и почек якутской лошади с Хангаласского улуса. Для выяснения возможности безопасного использования мяса и субпродуктов, мы изучали особенности накопления и распределения афлатоксина в тканях и органах лошади, а также скорость прижизненного освобождения их от токсина.
Для исследования отбирали пробы органов и тканей с наиболее характерными патологоанатомическими признаками для афлатоксикоза (дряблость сердечной мышцы, увеличение печени, желтушность слизистых оболочек, катарально-геморрагический гастроэнтерит и подкожные кровоизлияния). Из них в 3 пробах были обнаружены афлатоксины в концентрациях, улавливаемых методом ТСХ: в пробе печени лошади концентрация афлатоксина В1 1,7 мкг/кг, в почке 1,2 мкг/кг, а мышечной ткани 1,0 мкг/кг. Результаты исследований приведены в таблице 2.
Таблица 2
Афлатоксины в продуктах убоя (в мясе, печени, почках)
Концентрация афлатоксинов, мкг/кг кол-во пробмышечная ткань кол-во проб печенькол-во пробпочки11,011,711,2
Как видно из таблицы, в пробах исследованных образцов мышц, печени и почек больной лошади концентрации афлатоксинов были самые различные. В пробе печени лошади концентрация афлатоксина В1 1,7 мкг/кг, в почке 1,2 мкг/кг, а мышечной ткани 1,0 мкг/кг.
Таким образом, нами установлено накопление афлатоксина В1 в мясе, печени и в почках якутских лошадей, это связано с благоприятными климатическими условиями для роста того или иного вида токсинообразующих плесневых грибов и в том числе Aspergillus flavus в весеннее-летнее время ( +30 + 36°С, при влажности 50-78%), а также при неправильной переработке зерновых культур и в процессе их хранения в осенне-зимние периоды.
3.4 Органолептические и физико-химические показатели мяса якутских лошадей при афлатоксикозе
Проведено исследование 1 туши лошади с острым течением. (Из таблицы 3, видно, что изменения органолептических показателей мяса отмечены при всех течениях афлатоксикоза, но в большей степени при хроническом течении.)
Органолептические показатели мяса здоровых якутских лошадей характеризуется следующими свойствами: мышечная ткань от бледно-розового до темно-красного цвета. Мясо слегка влажное, на разрезе плотное, упругое, при надавливании пальцем ямка быстро выравнивается. Запах специфический, свойственный данному виду животного. Жировая ткань желтая. Бульон прозрачный, ароматный. Мясо нежное, легко разжевывается. Незначительная относительная жесткость проявляется в мясе, из шейного отдела.
Исследование, выполненное по определению органолептического свойства мяса, полученного от больной афлатоксикозом лошади, позволило установить, что туша имели неудовлетворительную степень обескровливания, место разреза неровное, инфильтрированное кровью. Мышечная ткань темно-красного цвета, неоднородная на поперечном разрезе. Мясо неэластичное, ямка при надавливании пальцем выравнивается медленно. При проведении пробы варкой установлено, что бульон мутный с хлопьями, запах кисловатый до неприятного.
Результаты органолептических исследований свидетельствуют о том, что мясо лошадей, больных афлатоксикозом, не отвечает требованиям стандарта по качественным показателям и имеет значительные отклонения от мяса здоровых животных (табл. 3).
Для определения качества мяса нами проведены физико-химические исследования, при этом учитывали ветеринарно-санитарные требования к качеству.
Реакция на пероксидазу в исследованных пробах мяса была сомнительной на 29%, отрицательной на 71%. У здоровой во всех случаях реакция на пероксидазу дала положительный результат.
Количество амино-аммиачного азота у здоровых животных составляет 1,26 мг%, у больной - 1,56 мг% на 10 мл вытяжки. Повышение содержания амино-аммиачного азота в мясе больной лошади произошло за счет накопления в организме больного животного промежуточных и конечных продуктов белкового метаболизма.
Реакция с сернокислой медью на продукты первичного распада белков в мясе больного животного дала положительный результат - бульон был мутный с хлопьями, у здоровых- бульон прозрачный.
Показатели летучих жирных кислот в мясе также были выше у больного, чем у здоровых на 3,6 мг/КОН, что соответствует мясу сомнительной свежести.
По комплексу физико-химических показателей мясо якутских лошадей при афлатоксикозе не отвечает требованиям стандарта и правил, соответствует сомнительной свежести (табл. 3).
Таблица 3
Результаты органолептического исследования мяса, полученного
от убоя якутских лошадей, больных афлатоксикозом
Показатели Результаты исследованийздоровыебольныеВнешний вид и цвет мясаПоверхность мяса красного цвета, на разрезе слегка влажная, не липкаяВлажное, липкое, темно-красного с вишневым оттенком цвета. Поверхность разреза липкая, мясной сок мутныйЗапахПриятный, характерный для вида животногоСлегка кисловатыйКонсистенцияМясо плотное, эластичное. Ямка при надавливании быстро выравниваетсяМясо неэластичное. Ямка при надавливании выравнивается медленно, не всегда полностьюСостояние жираЗапах специфический, консистенция плотная, цвет ярко-желтоватыйЗапах кисловатый, цвет с серовато-матовым оттенком. При сдавливании мажетсяСостояние бульонаПрозрачный, ароматный, на поверхности собираются крупные капли жираБульон мутный, с хлопьями, неароматный, незначительное количество жировых капель
Таблица 4
Физико-химические показатели мяса здоровых и больных якутских лошадей при афлатоксикозе
Показатели Группы животных здоровые больныеВеличина рН 5,6±1,5 6,6±1,7Реакция на пероксидазуПоложительнаяОтрицательнаяАмино-аммиачный азот, мг% на 10 мл вытяжки1,26±081,56±1,2Реакция на продукты распада белковОтрицательнаяПоложительная (с хлопьями)Количество летучих жирных кислот (мг/КОН)3,6±0,87,2±1,3
.5 Органолептические и физико-химические показатели жира якутских лошадей при афлатоксикозе
Одной из особенностей якутской лошади, разведенной в условиях Якутии, является депонирование в значительном количестве энергии в виде отложений жира за короткий период лета. Запасы подкожного жира составляют до 23,2% от массы туши, и жировые отложения на внутренних органах значительно увеличивают теплоизоляцию организма, что также служит источником энергетических ресурсов в организме [35].
Конский жир, в том числе жир молодняка якутской лошади, отличается от других животных жиров низкой температурой плавления, высокой усвояемостью, что определяется высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот. Как известно, ненасыщенные жирные кислоты не синтезируются в организме человека, поэтому их недостаточность должна восполняться потреблением растительных масел. А при употреблении жира жеребятины сбалансированность холестерина с ненасыщенными жирными кислотами препятствует отложению холестерина в сосудистую интиму в виде липоидоза с дальнейшим развитием атеросклеротической бляшки.
Жировая ткань у здоровых якутских лошадей имеет специфический приятный запах, за исключением жира-сырца с кишок, который издает запах, свойственный содержимому кишечника. Консистенция жировой ткани мягкая; цвет ее от бледно-желтого до желтого; вкус и запах после варки приятный. Кислотное число жиров находится в пределах 0,47-1,88. Содержание влаги колеблется в пределах от 0,20 до 0,25%. Конские жиры являются носителем витамина А, содержание которого, главным образом, зависит от пастбищного сезона и анатомо-топографического расположения жира в туше, упитанности и возраста животных. Конские жиры бедны холестерином, уровень которого зависит от анатомо-топографического расположения жира в туше. Наименьшее количество (6,25 мг %) холестерина содержит жир сердечной сорочки, наибольшее - жир прямой кишки (37,5 мг %).
Для оценки жира, полученного от якутской лошади больной афлатоксикозом, мы выбрали следующие показатели: органолептические, кислотное и перекисное число. Подкожный жир лошади, больной афлатоксикозом, существенно отличался от жира здоровых лошадей по запаху, цвету, консистенции и вкусу и был характерен для жира сомнительной свежести. Цвет жира желтоватый с неприятным салистым запахом, мажущей консистенции и кисловатым привкусом.
Кислотное число зависит от количества свободных жирных кислот, которые накапливаются при гидролизе и окислительной порче жиров. При определении кислотного числа жира, путем нейтрализации эфирно-спиртового раствора жира едким калием, нами получены следующие показатели: 1,8 мг/КОН из проб от здоровых животных и 2,9 мг от больного животного соответственно.
Характерные изменения были получены при определении перекисного числа жира методом способности перекисей в кислой среде окислять йодистый калий с освобождением молекулярного йода с последующим титрованием раствора гипосульфита натрия. При оценке степени свежести жира от здоровых и больных животных нами получены следующие результаты: 0,02 ммоль активного кислорода/кг, что характерно для свежего жира и 0,08 ммоль - для сомнительной свежести.
Таким образом, выполненные исследования свидетельствуют, что жир полученный от убоя больных афлатоксикозом лошадей, соответствует жиру сомнительной свежести и влечет за собой отрицательные последствия.
Таблица 5 Физико-химические показатели жира якутских лошадей, больных афлатоксикозом Показатели Группы животныхздоровые больныеКислотное число жира (мг/ КОН) 1,8±0,05 2,9±0,05Перекисное число, ммоль активного кислорода/кг0,02±0,0060,08±0,002
.6 Обезвреживание мяса, продуктов убоя и якутских лошадей при афлатоксикозе
Для изучения влияния термообработки на изменение уровня афлатоксина в продуктах убоя лошадей, мы подвергали мясо, печень и почки к 2-часовой варке в двойном количестве воды при температуре 100°С. Куски мяса, печени и почек массой не более 0,200-0,300 г, толщина 4-5 см. Проведенными исследованиями установлено, что после проварки мяса и органов концентрация афлатоксина В1 снижается в 2 раза, данные приведены в табл. 7.
Таблица 7
Концентрация афлатоксина В1 в органах и тканях лошади
Органы и ткани Время исследования До варки После варки Печень 5,92 2,87Почки 5,10 2,04Мышечная ткань 2,62 1,26
В печени больной лошади после проварки содержание афлатоксина В1 составило - 2,87, в почках - 2,04, в мышечной ткани - 1,26,мкг/кг.
Таким образом, при термообработке мяса и органов лошадей при содержании афлатоксина В1 уровень токсина снижается за счет перехода его в водную фракцию после 2-часовой проварки при температуре 100°С.
.7 Бактериологический контроль продуктов убоя якутских лошадей при афлатоксикозе
Для микробиологических исследований нами были отобраны пробы мышечной ткани, печени, сердца, почек и селезенки от 3 животных, из них больных 1 и 2 здоровых. Результаты исследований представлены в таблицах 8.
В результате бактериологических исследований 6 проб продуктов убоя якутских лошадей при афлатоксикозе нами выделены ассоциации различных аэробных и анаэробных микроорганизмов (E.coli, Cl.perphringens, Proteus, Staphilоcoccus).
Исследованиями установлено, что бактериальная обсемененность органов и тканей микроорганизмами составила 9,3% от общего числа исследованных проб.
В наибольшей степени бактериями группы кишечной палочки была обсеменена слизистая оболочка печени - 12,7% случаев, а обсемененность мышечной ткани, почек и селезенки составила: 6,3%, 2,1% и 2,1% соответственно. В пробах сердца и легких, данные микроорганизмы не были выделены ни в одном случае..Perfringens играет большую роль в этиологии пищевых токсикоинфекций. Термоустойчивые штаммы Cl.Perfringens широко распространены в природе, их споры могут попадать на пищевые продукты и активно размножаться, накапливать токсин в процессе их хранения и вызывать пищевую токсикоинфекцию (М.А. Сидоров; Р.П. Корнелова, 2000).
Как видно из данных таблицы 9, бактерия Cl.perfringens была выделена из печени - 2,1%.
Бактерии рода Proteus выделены из 2-х органов лошадей: из мышечной ткани и печени, что в процентном отношении составило 2,1% и 2,1%. Следует отметить, что не были контаминированы бактериями рода Proteus почки, селезенка, сердце и легкие.
Бактерии рода Staphilоcoccus в продуктах убоя лошади при афлатоксикозе обнаружены в печени - 4,2%, легких - 6,3%, селезенке - 4,2%.
Но в то же время не выявлены стафилококки из сердца, почек и мышечной ткани.
Представленные в работе результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что якутские лошади при афлатоксикозе являются носителями возбудителей пищевых токсикоинфекций и токсикозов.
Исследованиями установлено, что бактериальная обсемененность органов и тканей здоровых лошадей бактериями группы кишечных палочек выделены из печени - 5,2%. Другие органы и ткани оказались свободными от бактерий группы кишечных палочек. При этом не удалось выделить протей, стафилококки и Cl.perfringens в продуктах убоя здоровых животных.
Анализируя результаты проведенных исследований, можно прийти к выводу, что больные афлатоксикозом якутские лошади могут являться латентными носителями некоторых возбудителей пищевых токсикоинфекций и токсикозов в отдельных случаях.
В этой связи представлялось важным изучить некоторые морфологические и культуральные свойства микроорганизмов, выделенных в процессе исследования.
Кроме того, нами были выделены Сl.perfringens из печени, , которые отнесены к типу А.выделен в 2 пробах, выделенные микроорганизмы отнесены к 2 видам: P.vulgaris и P.mirabilis.
Стафилококки выделены, отнесены к одному виду Staphilococcus aureus.
Таким образом, фактический материал по бактериальной обсемененности продуктов убоя якутских лошадей при афлатоксикозе различными микроорганизмами свидетельствует о влиянии патологических процессов при афлатоксикозе на обсемененность туш лошадей, что необходимо учитывать при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса якутских лошадей.
Таблица 8
Бактериологический контроль продуктов убоя
Материал исследованияОбщая микробная обсемененность больных/здоровыхБГКПCl.PerfingensStaphilococcusProteusМышечная ткань9,3%/5,2%6,3%--2,1%Печень12,7%2,1%4,2%2,1%Легкие--6,3%-Почки2,1%---Селезенка2,1%-4,2%-Сердце----
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В случаях вынужденного убоя животных при остром и подостром афлатоксикозе внутренние органы необходимо направлять на изготовление сухих животных кормов и в корм зверям, а тушу используют по результатам лабораторного анализа.
В случае обнаружения сальмонелл или других возбудителей токсикоинфекций мясо подвергают обезвреживанию проваркой. При отрицательных результатах микробиологических исследований на сальмонеллы тушу направляют на выработку колбасных или консервных изделий.
Шкуру выпускают без ограничений.
Мясо и субпродукты для детского питания не используют.
При хронических афлатоксикозах, сопровождающихся дистрофическими изменениями во внутренних органах и в скелетной мускулатуре, все продукты убоя, кроме шкур, направляют на техническую утилизацию. Шкуры выпускают без ограничения.
ВЫВОДЫ
В условиях Республики Саха (Якутия) диагностирован афлатоксикоз животных якутской породы на фоне общей симптоматики с проявлениями характерных клинических специфических признаков: затрудненное дыхание, волосяной покров матовый, шаткость походки, поддергивание мышц, случаи абортов.
Органолептические и физико-химические показатели мяса и жира якутских лошадей больных афлатоксикозом находятся в пределах величин характерезующих его, как мясо и жир сомнительной свежести.
Концентрация афлатоксина В1 после 2- часовой проварки снижается во внутренних органах и в мышечных тканях в 2 раза. В результате проварки мяса больных афлатоксикозом лошадей в течении 2,5 часов содержание афлатоксина В1 было меньше на 30,4%, в мышечной ткани на 29,0% чем в таковых до тепловой обработки.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Абрамов А.Ф. Якутская лошадь (экология, размножение, питание, оптимизация воспроизводства): Автореф. дисс. - М.,1991. - С.72.
Абрамов А.Ф. Эколого- биохимические основы производства кормов и рационального использования пастбищ в Якутии / под ред. И.Г. Буслаева. - Новосибирск, 2000 - 208 с.
Алексеева А. А.» Афлатоксикозы сельскохозяйственных животных» в кн.: Итоги науки и техники. Сер. Животноводство и ветеринария, т. 8 - Проблемы ветеринарии, М., 1975, с. 132-79.
Алексеева А.А. Афлатоксикозы сельскохозяйственных животных // Животноводство и ветеринария. - 1975. - т.8. - С. 132-179.
Алексеев Н.Д. Эколого-физиологические особенности якутской лошади / Н.Д.Алексеев, Н.П.Андреев // Эколого-физиологические особенности животных Якутии / АН СССР. Сиб.отделение. - Новосибирск, 1976. - С.173-183.
Аммосова Т.В. Молочные качества якутской лошади. - В кн.: Интенсификация животноводства в Якутии / Сиб. отд-ние ВАСХНИЛ. - Новосибирск, 1985 - С. 50-51.
Андреев Н.П., Другин П.С. Мясная продуктивность якутских лошадей. - Якутск: Кн. Изд-во, 1970. - 94 с.
Андросов Н.Е. Влияние скармливания ЭПВМ подкормки на биохимические показатели крови кобыл // Научно-технический прогресс и резервы повышения эффективности коневодства: Тез. науч. конф. молодых ученых / ВНИИК, - Рязань, 1987. С. 85-87.
Беленький Н.Г. Проблема биологической оценки сырья и пищевых продуктов животного происхождения. - М., 1981. - С.35-36.
Белова Т.Н., Троицкая Т.Л. « Биологическая характеристика культуры сальмонелл тифимуриум, выделенных при различных эпидемиологических ситуациях.» // Сальмонелезы.- Горький, 1981. С 49-54
Билай В.И., Пидопличко Н.М. «Токсинообразующие микроскопические грибы и вызываемые ими заболевания человека и животных.» Киев: Наукова думка. - 1970. - 291с.Степушин А.Е. « Профилактика микотоксикозов» - М.: Колос, 1998. - 103 с.: ил. с. 13.
Богуш А.А. Мясо, его переработка и хранение.- Минск: Урожай, 1995 -С.176.
Будагян Ф.Е., Полячек Я.Г. Пищевые токсикозы, токсикоинфекции и их профилактика - М., 1961. - С. 63-68.
Бухарбаева А.С., Ников П.С. Микотоксины. - Оренбург: Оренбургский мед инс-т. 1977. - с. 29-31.
Винокуров И.Н. Рост, развитие и мясная продуктивность молодняка якутской породы лошадей центрального типа // Идентификация животноводства в Якутской АССР: Сб. науч. тр. / ВАСХНИЛ СО. - Новосибирск: РПО ВАСХНИЛ, 1990. - С. 108-115.
Волохова Е.С. Физико-химические показатели мяса и жира свиней, полученных при откорме в крупных комплексах//Сб.работ ЛВИ.вып 42.-Л.,1975. С.38.
Вольферц В.Ю. Ветеринарно-санитарная экспертиза. Изд-е 5-е, перераб. // М.: Сельхозиздат, 1950. - С.67-71.
Воронский Е.Н. Биохимия сельскохозяйственных животных. - Л.: Пищепрмиздат, 1980. - 330 с.
Вылегжанин А.Ф. и др. // Легкая и пищевая промышленность. М.,1983. - С.480.
Габович Р.Д., Припутина Л.С. «Микотоксины в пищевых продуктах и профилактика алиментарных микотоксикозов // Гигиенические основы охраны продуктов питания от вредных химических веществ.» Киев: Здоровье, 1987. - с. 117-135.
Габышев М.Ф. Якутское коневодство. - Якутск: Кн. изд-во. 1966. - С.253.
Григорьева Р.З. «Безопасность продовольственного сырья и продуктов питания.» Уч. Пособие. Кемерово, 2004. - С. 21-26.
Житенко П.В., Боровков М.Ф. Ветеринарно-санитарная экспертиза
Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А «Ветеринарная токсикология». - 2011г. 276-277
Калашников А.П., Мысик А.Т. Результаты исследований и задачи науки по повышению качества продуктов животноводства// Повышение качества продуктов животноводства. - М., 1982. - С.3
Кожевников Е.М. Ветсанэкспертиза тушек птиц при афлатоксикозе В1 // Ветеринария. - 1989. - №3.- С. 10-13.
Косенкова М.М. к вопросу об особенностях проявления патологоанатомических изменений в органах и тканях у телят при экпериментальном афлатоксикозе. М.: МГАВМиБ, 1995
Котик.А.Н., Труфанов О.В., Труфанова В.А. «Словарь токсикологических терминов». - Харьков: НТМТ, 2006.- 100 с.
Котик А.Н., 1974 Афлатоксикоз птиц // Птицеводство. - 1974. - №7. С.46-48.
Кузнецов А.Ф. Ветеринарная микология // А.Ф. Кузнецов - СПб.: Лань, 2001. - С.319-321Нечаев А.П. «Пищевая химия.» СПб.: ГИОРД, 2003 - 640 с.
Кузнецов А.Ф. Ветеринарная микология // А.Ф. Кузнецов - СПб.: Лань, 2001. - С.319-321.
Курасова В.В. Методы исследования в ветеринарной микологии. - М.: Колос, 1971. - 312 с.
Майканов Б.С. Накопление афлатоксина В1 в органах и тканях уток // Сб. научн. Тр. ВСХИ. - 1986. - С.4-6.
Мосорин Д.Н. Эффективность аминокислотных добавок при подкормке молодняка табунных лошадей // Современное состояние и перспективы развития научных исследований по коневодству: Тез. докл. Всесоюз. науч. совещ. - ВНИИК, 1989. - С.112-114.
Петрович С.В. Микотоксикозы животных. - М.: Росагропромиздат,
. - 238 с.
Покровский А.А., Тутельян В.А., Кравченко Л.В. «Афлатоксины» // Токсикология. - 1977. - т.8. - 91 с.
Рыжиков Б.Д. Качество мяса свиней при микотоксикозах // Ветеринария. - 1971. - №11. - С. 98-100.
Саттон Д. Определитель патогенных и условно-патогенных грибов: пер с англ. / Д. Саттон, А.Фотергилл, М. Ринальди. - М.: Мир, 2001. - 486 с.
Сивцева Н.А. « Микозы и микотоксикозы» - 1965. - с. 290
Скалинский Е.И., Белоусов А.А. Микроструктура мяса. - М.: Пищ.
промышленность, 1973. - С.176.
Смирнов У.С., Зайченко Ф.М., Рубежняк И.Г. «Микотоксины: Фундаментальные и прикладные аспекты.» // Современные проблемы токсикологии. - 2000. - №1. - С. 2-12.
Смородинцев И.А. Биохимия мяса.- Пищепромиздат. М., 1952.
Степушин А.Е. « Профилактика микотоксикозов» - М.: Колос, 1998. - 103 с.: ил. с. 13.
Тутельян В.А., Кравченко Л.В. Афлатоксины // Микотоксины. -
М., 1985. - С. 23-121.
Финогенова Н.В. К вопросу о химическом составе говяжьего мяса // Вопросы питания. - 1968. №2. С.78.