Повышение эффективности использования гидроидов при биотестировании: выбор вида, сезона, температурного режима

Повышение эффективности использования гидроидов при биотестировании: выбор вида, сезона, температурного режима

Повышение эффективности использования гидроидов при биотестировании: выбор вида, сезона, температурного режима

Карлсен А. Г., Марфенин Н. Н.

Среди различных видов гидроидов чувствительность к повышенному содержанию в морской воде ионов цинка во много раз различается. С помощью регистрации доли рассосавшихся за 1—2 сут гидрантов у ObeUa loveni можно без применения дорогостоящего оборудования даже в полевых условиях установить наличие в воде токсических примесей (ионов цинка в концентрации 0,5 мг/л и выше). Чувствительность метода может быть повышена, если использовать материал в период начала активного роста колоний после зимней диапаузы.

В последнее время была экспериментально доказана высокая чувствительность гидроидов к различным токсическим веществам, добавляемым к морской воде (Karbe, 1972; Stebbing, 1980a, 1981), что ставит их в ряд перспективных объектов для биотестирования (Stebbing, 1980b). Поэтому возникла необходимость выявить среди гидроидов виды, наиболее чувствительные к токсикантам, и условия, при которых указанная чувствительность проявляется в наибольшей мере.

Работа в этом направлении уже была начата нами ранее (Карлсен, Марфенин, 1987). На трех видах гидроидов рода Obelia—О. loveni (Allm., 1859) О. flexuosa (Hincks, 1861), 0. geniculata (L., 1758), взятых из моря в августе, было испытано в лабораторных условиях действие различных концентраций ионов цинка и меди в морской воде. Эффект токсического воздействия регистрировали по доле дедифференцировавшихся гидрантов через 1—2 сут, сопоставляя их в экспериментальных и контрольных колониях. Тогда было установлено, что, вопервых, среди обелий наиболее чувствительный к тосикантам вид О. loveni. а вовторых, чувствительность его к токсическому воздействию повышается при возрастании температуры (от 14 к 18°).

В настоящем исследовании мы продолжили изучение сравнительной чувствительности различных видов гидроидов к ионам цинка, испытав его воздействие на более примитивных гидроидах Clava multicornis (Forskal, 1775) и Coryne tubulosa (M. Sars, 1835), относящихся к подотряду Athecata.

Кроме того, мы проверили реакцию на длительное воздействие (до 22 сут) различных концентраций ионов цинка трех видов обелий: О. longissima (Pallas, 1766), 0. loveni, 0. flexuosa, а также более высокоорганизованного гидроида Dynamena pumila (L., 1758) из семейства Sertulariidae того же подотряда Thecaphora.

Наконец, для О. loveni проведено сравнение реакции гидроида на стандартные испытываемые нами концентрации ионов цинка в разное время вегетационного сезона—в его начале (апрель) и в конце (август).

Полученные результаты позволяют сделать предварительные выводы о характере вариаций в чувствительности гидроидов к токсикантам, что поможет, как мы надеемся, избежать необоснованных экстраполяции и уточнить подход к выбору объектов для биотестирования.

Материал и методы

Основные методы описаны в предыдущих публикациях. Культивирование гидроидов в лабораторных условиях осуществляли по специально разработанному методу (Бурыкин с соавт., 1984). Рост гидроидов учитывали периодически, подсчитывая число имеющихся в колонии гидрантов. Метод определения действия ионов цинка на процесс дедифференцировки гидрантов сводился к сравнению относительного количества дедифференцировавшихся гидрантов в опыте и контроле (Карлсен, Аристархов, 1986; Карлсен, Марфенин, 1987). Относительное количество дедифференцировавшихся гидрантов определяли как отношение их числа к общему числу гидрантов в колонии к моменту наблюдения (в процентах). Общее количество гидрантов в каждом опыте было не менее 30 и, как правило, превышало 100. Самые большие выборки (200— 400 гидрантов) были в опытах, в которых определяли действие минимальных концентраций токсиканта. В этих же статьях описан способ приготовления рабочих растворов, содержавших ионы цинка в повышенной концентрации. При кратковременных наблюдениях (около 2 сут) растворы не меняли, гидроиды находились в чашках Петри в термостате. При хронических экспериментах растворы меняли 1 раз в 2 сут. Срок выбран на основании данных, показывающих, что через 2 сут 20%, а через 6 сут 80% ионов ртути “исчезает” из раствора (Baier et al., 1975). Специальные исследования поведения ионов цинка в растворе не проводили.

Статистическую обработку результатов проводили по критерию Стыодента (Лакин, 1980).

Материал собирали в разные месяцы: в марте, апреле, мае и августе в течение 1984 и 1985 гг. На Еремеевском пороге Великой Салмы Белого моря. Работу проводили на Беломорской биостанции МГУ (пос. Приморский).

Результаты

1. Действие ионов цинка на гидроидов Clava multicornis (Forskal, 1776) и Coryne tubulosa (M. Sars, 1835) (подотряд Athecata). Представители подотряда Athecata оказались менее чувствительными к действию ионов цинка, чем исследованные нами обелии из подотряда Thecaphora. Так, гидроид Clava multicornis, принесенный с моря в августе после полового размножения, сохранял жизнеспособность в растворах, содержавших ионы цинка в концентрациях 10,0, 5,0 и 2,5 мг/л в течение 39 ч (до конца эксперимента).

Колонии Coryne tubulosa, принесенные с моря в марте и постепенно адаптированные к теплой (18°) воде, наблюдали в течение 20 сут. Колонии в контрольных условиях быстро росли, увеличивалось число гидрантов. Практически так же хорошо рос гидроид в растворе с концентрацией ионов цинка 1,0 мг/л. При 2,5 мг/л колонии не погибали, но их рост не сопровождался заметным увеличением числа гидрантов, т. е. количество образовавшихся новых и дедифференцировавшихся старых гидрантов было приблизительно одинаковым (рисунок. А). При 3,0 мг/л все колонии погибали не позднее, чем через 2 сут.

Количество гидрантов в колониях, которые росли в условиях повышенных концентраций ионов цинка; А — Coryne tubulosa, Б—Obelia flexuosa, В—Obelia geniculata Г—Obelia loveni, /—контроль; концентрация ионов цинка 2,5 мг/л (2), 1,0 (3), 0,5 (4), 0,25 мг/л (5)

2. Долговременный рост гидроидов рода ObeUa (подотряд Thecaphora) в присутствии повышенных концентраций ионов цинка. Если колонии, извлеченные из моря в начале марта, когда они находятся в состоянии гипобиоза, предварительно адаптировать к теплой (18°) воде в течение 6 сут, то все они начинают бурно расти. В контрольных условиях этот рост сохраняется на протяжении всего эксперимента (15—22 сут).

В присутствии ионов цинка в концентрации 1,0 мг/л все три вида гидроидов растут хуже, чем в контрольных условиях, и через 10—12 сут погибают (рисунок, б—г). При концентрации 2 мг/л гидроиды погибают через 2 сут. При концентрации 0,5 мг/л Obelia flexuosa и Obelia longissimа растут практически так же, как в контроле (рисунок, Б, 5), а О. loveni растет хуже (рисунок, Г), хотя в течение всего эксперимента не гибнет. При концентрации 0,25 мг/л и О. loveni растет так же, как в контроле.

3. Действие повышенных концентраций ионов цинка на гидроид Dynamena pumila (подотряд Thecaphora). Рост колоний D. pumila в эксперименте был неустойчив, поэтому удалось установить только летальные концентрации ионов цинка, которые оказались выше, чем у обелий.

Длительные наблюдения за состоянием гидроида показали, что если его в марте сразу поместить в раствор с ионами цинка в период адаптации к теплой воде, то он погибает в течение 2—3 дней в растворе 3,0 и 2,5 мг/л и через 20 дней при концентрации 1 мг/л. Если же гидроид предварительно в течение 6 сут адаптировать к теплой воде и только после это го поместить в экспериментальные условия, то он, по крайней мере в течение 18 сут, сохраняет жизнеспособность при концентрации ионов цинка 2,5 мг/л.

Таблица 1

Доля дедифференцировавшнхся гидрантов (%) у Obelia loveni при 18° в разные периоды вегетации в материале из моря (*) и в лабораторной культуре (**) после увеличения концентрации ионов цинка

Примечание. Различие в 19% и более достоверно с вероятностью 95—99,9%. Меньшие различия кедосто верны,

4. Особенности регистрации токсического эффекта на гидроидах в зависимости от периода их вегетации. На наиболее чувствительном к воздействию ионов цинка гидроиде О. loveni мы сопоставили реакцию его гидрантов на повышенные концентрации ионов цинка ранней весной (апрель) и в конце лета (август), а также в марте (лабораторная культура). Мы рассчитывали выяснить, одинаковы ли вызывающие токсический эффект пороговые концентрации ионов цинка в начале и в конце сезона вегетации.

Как уже отмечалось выше, ранней весной колонии О. loveni в море еще не растут и бывают без гидрантов. Перенос их в аквариум с более теплой водой (в данном случае 17—18°) стимулирует образование гидрантов и начало роста побегов и столонов. На этом фоне перехода из одного морфофункционального состояния в другое (Марфенин, 1980) было проведено испытание токсического воздействия цинка в одной серии опытов (табл. 1, апрель). В другой серии опыты были осуществлены не сразу после переноса материала из моря в значительно отличающиеся по температуре аквариумные условия, а лишь по прошествии 1—2 нед, т. с. после того, как прошла адаптация гидроидов и культура стала лабораторной (табл. 1, март).

В августе материал для опытов брали иа моря. Различие по температуре при переносе гидроидов в лабораторию было всего в несколько градусов (от 14 до 18°).Результаты опытов, проведенных по единой методике учета доли рассосавшихся гидрантов во взятых для эксперимента побегах О. loveni, показали, что при концентрации цинка, равной 2,0 мг/л, и температуре 18° через 18—22 ч все гидранты у подопытных побегов дедифференцируются во всех случаях.При концентрации ионов цинка, равной 1,0 мг/л, доля дедифференцировавшихся гидрантов через 18—22 ч была выше в августе, а весной была выше в лабораторной культуре (табл. 1). Однако через 43—46 ч в весенних опытах доля рассосавшихся гидрантов стала выше в материале, взятом непосредственно из моря. Это означает, что через 2 сут при данной температуре и при данной концентрации ионов цинка реакция гидроидов во всех случаях приблизительно одинакова.

При меньшей концентрации ионов цинка (0,5 мг/л) токсический эффект через 18—22 ч проявился в весеннем материале, взятом из моря (апрель), и в августовском материале. В лабораторной культуре весной доля дедифференцировавшихся гидрантов в это время от контроля достоверно не отличалась. Однако через 2 сут токсическое действие ионов цинка проявилось и в лабораторной культуре, хотя доля рассосавшихся гидрантов оставалась все же более низкой, чем в материале из моря.

Таблица 2

Зависимость доли дедифференцировавшихся гидрантов (%) у гидроида Obelia loveni, взятом из моря от температуры, концентрации ионов цинка в морской воде и продолжительности опыта

* Отличия ог контроля с вероятностью 95%. ** То же, Р=99,0%.

Примечание. Опыты при температуре 18 и 22° были поставлены в мае. а при 14,5° в августе.

Данные по дедифференцировке гидрантов в эксперименте могут иметь значение для оценки токсического эффекта лишь при сопоставлении с контрольными значениями, которые сильно различались в перечисленных трех сериях опытов.Менее всего дедифференцировка гидрантов в контроле была выражена в материале, взятом весной из моря, накануне перед опытом, сильнее в лабораторной культуре и еще больше доля дедифференцировавшихся гидрантов в контроле была в августовском материале.Чем интенсивнее идет дедифференцировка гидрантов в контроле, тем сложнее использовать материал для биотестирования. Так, например, по абсолютным значениям дедифференцировавшихся гидрантов в опытах с действием ионов цинка было больше всего в августе, но и дедифференцировка в контроле была в это время самой большой. Поэтому нельзя утверждать, что в августе гидроиды более чувствительны к токсическому воздействию ионов цинка. Скорее мы приходим к обратному заключению, что именно весной, вскоре после перехода колоний в период активного роста благодаря относительно слабой дедифференцировке в контроле возможна более чуткая индикация пороговых значений токсических примесей.

5. Роль температурного режима в повышении чувствительности метода. Повышение температуры до некоторых пределов приводит к ускорению ряда физиологических процессов, в том числе у гидроидов: к ускорению роста колонии (Kinne, Paffenhofer, 1966; Tusov, Davis, 1971; Бурыкин, 1980), интенсивности дедифференцировки (Crowell, 1953) и формирования (Crowell, 1957) гидрантов, уменьшению периода ростовых пульсаций (Wyttenbach, 1974) и т. д. Поэтому мы попытались повысить чувствительность метода с помощью регистрации токсического эффекта при наиболее высокой температуре, близкой к верхней температурной границе существования этих гидроидов (табл. 2).

В мае колонии О. loveni, находящиеся в состоянии перехода из зимнего гипобиоза к активному росту, мы переносили в лабораторию и содержали при температуре 22,0°. Порог чувствительности к цинку оказался в этом случае не выше 0,25 мг/л. При 18° (параллельный эксперимент) и при 14,5° (август) пороги чувствительности гидроидов к ионам цинка оказались около 0,5 и 1,0 мг/л соответственно (табл. 2). Поэтому увеличение температуры можно рассматривать как один из путей повышения чувствительности метода.

Обсуждение результатов

Впервые достаточно высокая чувствительность гидроидов к цинку была обнаружена Карбе (Karbe, 1972). Он провел экспериментальные исследования гидроида Eirene viridula Eschscholtz, 1829, относящегося к сем. Campanulinidae, подотряд Thecaphora, и установил, что полипы чувствительны к ионам цинка при концентрации 1,5—3,0 мг/л.Вслед за Карбе английский исследователь Стеббинг (Stebbing, 1976, 1979, 1980b; Stebbing, Santiago—Fandino, 1983) подробно занялся возможностью использования гидроидов в качестве тестобъектов. Используя гидроид Obelia flexuosa (Hincks, 1861) из сем. Campanulariidae, подотряд Thecaphora, он показал, что колонии этого гидроида погибают при содержании в морской воде меди в концентрации около 0,05 мг/л, а кадмия—0,5 мг/л. Пытаясь обнаружить токсическое действие тяжелых металлов на организм гидроидов задолго до их гибели, Стеббинг стал использовать различные морфологические и физиологические показатели, например частоту образования гонозооидов (специализированных половых зооидов), скорость роста тела колонии, число зооидов в экспериментальных колониях по отношению к контролю. Таким способом Стеббингу удалось достоверно зарегистрировать эффект стимуляции роста колонии и частоты образования гонозооидов при очень малых концентрациях токсикантов (0,1 мкг/л меди и 0,05 мг/л кадмия) (Stebbing, 1980a, 1981). Этот эффект, известный ранее под названием закона АрндтаШульца, а затем “хормезиса”, был описан неоднократно для разных объектов (Stebbing, 1982). Для нас важно, что Стеббинг подробно изучил его проявление и по возможности механизм у гидроидов с целью практического использования этого эффекта для биотестирования (Stebbing et al., 1983).

Метод основан на регистрации дедифференцировки гидрантов в эксперименте и контроле. Рассасывание гидрантов и частей колонии—характерное явление у гидроидов. Оно было обнаружено в начале нашего века (Thatcher, 1903; Huxley, DeBeer, 1923) и первоначально считалось результатом реакции колонии на неблагоприятные условия существования, в частности воздействия ядов.Хаксли и Де Вир на гистологических препаратах подробно исследовали весь процесс рассасывания гидрантов у О. geniculata и сравнили его с дифференцировкой в обратной последовательности—укорачиваются щупальца, смыкается гипостом, утоньшается и делается короче тело гидранта, становясь похожим на зачаток в момент начала дифференцировки гидранта. Исходя из этих особенностей процесса, они назвали его “дедифференцировкой”. Они же установили, что материал дедифференцировавшихся гидрантов поступает внутрь колонии и используется ею.

После того как колонии гидроидов научились содержать в лабораторных условиях (Fulton, 1960), выращивая их на стеклах, Кровеллом (Crowell, 1953) было обнаружено, что у кампануляриид дедифференцировка гидрантов—регулярный процесс, связанный с их (гидрантов) коротким жизненным циклом. На месте дедифференцировавшихся гидрантов через короткое время при благоприятных условиях образуются новые гидранты, которые, так же как и предшествовавшие им, примерно через неделю “старятся” и рассасываются.

Все это помогает лучше представить возможности повышения эффективности использования нашего метода для биотестирования. Пытаясь увеличить “разрешающую способность” предлагаемого метода, мы должны действовать одновременно в двух направлениях—искать способы повышения чувствительности гидрантов к токсикантам и в то же время пытаться уменьшить скорость рассасывания их в контроле.Что касается чувствительности объекта к токсикантам, то преждевсего следует выявить наиболее восприимчивые к ним виды гидроидов.. Ранее (Карлсен, Марфенин, 1987) мы уже установили, что из трех видов рода Obelia наиболее удачный для биотсстирования — О. lovеni.Испытание еще четырех видов гидроидов из разных семейств, результаты которого приведены в данной статье, показало, что они менее чувствительны к токсическому действию ионов цинка по сравнению с О. loveni. Следовательно, подтвержден сам факт различной восприимчивости гидроидов к токсикаптам, и дальнейший поиск наиболее чувствительных видов имеет смысл и должен быть продолжен.Можно ожидать, что степень влияния токсикантов на колонии различается на разных этапах их жизненного цикла. Действительно, в жизни колонии есть периоды, в течение которых токсический эффект, вероятно, трудно было бы установить. Это, например, гипобиотическое состояние во время зимней диапаузы или же период депрессии после размножения (Марфенин, 1980). С другой стороны, были основания предполагать, что переход из гипобиотического состояния к активному росту колонии или же период подготовки колонии к зимней диапаузе более восприимчивы к токсическим воздействиям.

Мы не проводили систематического изучения этого вопроса, а ограничились сравнением действия цинка на двух этапах жизненного цикла колонии, первый из которых соответствует переходу из гипобиотического к активному состоянию ранней весной, а второй—росту после размножения в конце лета. Можно считать, что различие в степени проявления токсического эффекта подтвердилось, однако это произошло на фоне еще более значительных различий в контроле. Это служит хорошим примером того, что уменьшение дедифференцировки гидрантов в контроле—не менее важный путь увеличения разрешающей способности методики. Эффективность метода можно также повысить, работая при более высоких температурах.

Если же подойти к проблеме повышения эффективности использования гидроидов для биотестировапия со стороны совершенствования контроля, то и в этом случае, судя по полученным нами результатам, можно надеяться на весомый успех. Почти в 20 раз различалась доля дедифференцировавшихся гидрантов в контроле через 20 ч после начала эксперимента у колоний при переходе из гипобиотического состояния, с одной стороны, и летнем материале—с другой. При переходе колоний к активному росту после зимней диапаузы все гидранты начинают расти одновременно и, следовательно, должны дедифференцироваться также одновременно—приблизительно через 1 нед. Этим объясняется столь низкое значение доли дедифференцировавшихся гидрантов в контроле у апрельской серии через 20 ч. Достаточно было провести эксперимент на материале, уже адаптированном к комнатной температуре, т. е. через 1—2 нед после начала роста колоний, как доля дедифференцировавшихся гидрантов в тех же условиях стала существенно выше.

Через 2 сут после начала эксперимента дедифференцировка гидрантов в контроле всегда возрастала. Это связано с тем, что по условиям предлагаемой методики побеги с гидрантами не получали пищи. Голодание ускоряло рассасывание и одновременно делало более редкой дифференцировку новых гидрантов.

Таким образом, в результате проведенных исследований стало ясно, что для биотестирования лучше всего использовать колонии в период .перехода их из состояния покоя в состояние активного роста. По дедифференцировке гидрантов в течение 1 сут можно достоверно зарегистрировать токсический эффект малых концентраций ионов цинка в воде, .которые, как показали долгосрочные эксперименты, являются сублетальными даже для испытываемых видов гидроидов, а тем более для других организмов.

Список литературы

Бурыкин Ю. Б. Регулирующая роль некоторых экологических факторов в процессах роста и интеграции колониальных гидроидов//Теоретическое и практическое значение кишечнополостных. Л.: ЗИН АН СССР, 1980. С. 16.

Бурыкин Ю. Б., Марфенин Н. Н„ Карлсен. А. Г. Опыт содержания мирского колониального гидроида Dynamena pumiia (L.) и лабораторных условиях//Научн. докл, высш. школы. Биол. науки. 1984. № 1. С. 102.

Карлсен. А. Г., Аристархов В, М. Изменение постоянным магнитным полем токсического действия растворов хлорида цинка на колониальных гидроидов Obelia loveni и Obelia flехиоsа//Изв. АН СССР. Сер. биол. 1986. № 2. С. 230—237.

К.арлсен А. Г., Марфенин 11. Н. Действие повышенных концентраций ионов цинка на некоторых гидроидов//Научн. докл. высш. школы. Биологические науки, 1987,№ 1, с. 71—73

Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высш. школа, 1980. С. 104, 271. Марфенин Н. Н. Основные морфофункциональные состояния колонии у гидроида Dynamena pumiia (L.) в естественных условиях//Докл. АН СССР. 1980. Т. 255. № 1.С. 253.

Патин, С. А. Особенности распространения и биологического действия загрязняющих веществ в Мировом оксане//Человек и биосфера. М.: Издво МГУ, 1982. Вып. 7.С. 62.

Baier R. W. Wojnowich G., Petrie L. Mercury loss from culture media//Analyt. Chem. 1975. V. 45. P. 2464.

Crowell S. The regressionreplacement cycle of hydranths of Obelia and Campanularia//Physiol. Zool. 1953. V. 26. № 4. Р. 319.

Baier R. W., Wojnowich G., Petrie L. Mercury loss from culture media//Analyt. Chem. 1975. V. 45. P. 2464.

Crowell S. The regressionreplacement cycle of hydranths of Obelia and Campanularia//Physiol. Zool. 1953. V. 26. № 4. Р. 319.

Crowell S. Differential responses of growth zones to nutritive level, age, and temperature in the colonial hydroid Campanularia//J. Expti Zool. 1957. V. 134. P. 63.

Fulton С. Culture of a colonial hydroid under controlled conditions//Scicnce. 1960,V. 132. P. 473.

K.arhe L. Marine Hydroiden als Testorganismen zur Prufung der Toxizitat von Abwasserstoffen. Die wirkung von Schwermetallen auf Kolonien von Eirene viridula//Marine Biol. 1972. В, 12. № 4. S. 316.

Kinne 0., Paffenhoger G. A. Growth and reproduction as a function of temperature and salinity in Clava multicornis (Cnidaria, Hydro2oa)//Helgolander wiss. Meeres. 1966.В. 13. № 1—2. S. 62. Stebbing A, R. D. The effect of low metal levels on a clonal hydroid//J. mar. biol. Ass.U. K. 1976. V. 56. P. 977.

Stebbing A. R. D. As experimental approach to the determinants of biological water quality//Phi!os. Trans. Roy. Soc. London. 1979. V. 286. P. 465.

Stebbing A. R. D. Increase in gonozooid frequency and adaptive response to stress in Campanularia flexuosa.— In: Developmental and cellular biology of coelenterates/' Eds Tardent P., Tardent R Amsterdam: Elsevier, 1980a. P. 27.

Stebbing A. R. D. The biological measurement of water quality //Rapp. P.—v. ReunCons. int. Exolor. Mer. 1980b. V. 179. P. 310.

Sfebbing A. R. D. Hormesis—stimulation of colony growth in Campanularia flexuosa' (Hydrozoa) by copper, cadmium and other toxicants//Aquatic Toxicol. 1981. V 1. P. 227.

Stebbing A. R. D. Hormesis—the stimulation oi growth by low levels of inhibitors//Scitotal environment. 1982. V. 22. P. 213.

Stebbing A. R. D., Cleary J. S Brinsley M„ Goodchild C., Santiago — Fandino V. Responses of a hydroid to surface water samples from the river Tamar and Plymouth sound in relation to metal concentration s/'/J. mar. biol. Ass. U. K. 1983. V. 63. № 4. Р. 695.

Sfebbing A. R. D„ Santiago—Fandino V. G. R. The combined and separate effect of copper and cadmium on the growth of Campanularia flexuosa (Hydrozoa) colonies// Aquatic Toxicol. 1983. V. 3. P. 183.

Thuicher H. F. Absorption of the hydranth in hydroid polyps//Biol. Bull. 1903. V. 5. №2. Р. 295.

Tusov J; Davis L. V. Influence of environmental factors on the growth of Bougainvillia. sp.//Exptl Coelenterate Biol./Eds Lenhoff H. M., Muscatine L., Davis L. V. Honolulu. 1971. P. 54.

Wyttenbach C. R. Cell movements associated with terminal growth in colonial hydroids//Amer. Zool. 1974, V. 14. № 2. Р. 699.

Для подготовки данной работы были использованы материалы с сайта http://soil.msu.ru/