Здоровые
лица Сифилис первичный Сифилис вторичный
|
13,18±0,10
13,93±1,72 20,49±1,31
|
74,32±1,93 86,41±5,02 94,47±1,94
|
2,94±0,32 5,94±0,98 7,47±0,58
|
28,18±2,51 17,91±2,13 16,04±1,04
Uo -
минимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
Ud -
максимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
t - полупериод спонтанной агрегации
эритроцитов; - индекс агрегации эритроцитов.
Агрегация эритроцитов при гепатите В и С
Одним из ведущих факторов патогенеза вирусных
гепатитов являются нарушения в системе микроциркуляции, оказывающие существенное
влияние на кровообращение в целом, на тканевой гомеостаз, что отражается на
функциях важнейших систем организма.
При вирусных гепатитах В и С
отмечается увеличение Uo, Ud в 1,5 раза, увеличение Ja
более чем в 3 раза, а также снижение t в 2,9 раза
по сравнению с таковыми показателями у здоровых [3]. В таблице 1.5 представлены
данные показателей ОАЭ периферической крови у больных ОВГ в различные периоды
заболевания.
Таблица 1.5 - Показатели ОАЭ периферической
крови у больных ОВГ в различные периоды заболевания
Показатель
|
Здоровые
|
I период
|
II период
|
III период
|
IV период
|
Uo,
В Ud, В Ja t,
c
|
12,8±1,0 73,5±2,0 2,84±0,32 28,8±2,5
|
15,5±0,8 95,9±3,2 6,60±0,48 16,9±1,3
|
20,0±2,4 87,4±3,3 4,40±0,37 22,9±1,7
|
14,4±1,3 80,7±3,2 3,47±0,34 26,5±2,1
|
16,3±1,5 85,0±5,0 2,80±0,30 32,6±2,0
|
Примечание. Периоды: I
- разгар, II - угасание
клинических симптомов, III
- ранняя реконвалесценция, IV
- поздняя реконвалесценция.
Uo -
минимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
Ud -
максимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
t - полупериод спонтанной агрегации
эритроцитов; - индекс агрегации эритроцитов.
Указанные изменения функционального состояния
красных кровяных клеток закономерно приводит к развитию расстройств
микроциркуляции, возникновению гипоксии ткани, осложняющих течение основного
патологического процесса, усугубляя цитопатическое действие гепатотропных
вирусов.
Агрегация эритроцитов при острой пневмонии
Отклонения в реологических характеристиках крови
в микрососудах играют важную роль и при развитии острой пневмонии.
При данном воспалительном процессе отмечается
изменение показателей ОАЭ по сравнению со здоровыми лицами: увеличение
максимальной механической прочности агрегатов эритроцитов (Ud, В), индекса
агрегации эритроцитов (Ja) и уменьшение значений минимальной механической
прочности агрегатов эритроцитов (Uo,
В), полупериода спонтанной агрегации эритроцитов (t,
с) [7]. Данные показателей ОАЭ представлены в таблице 1.6.
Таблица 1.6 - Показатели ОАЭ у больных острой
пневмонией
|
Uo, B
|
Ud, B
|
Ja
|
t, c
|
Здоровые
лица Больные с острой пневмонией
|
11,98±1,53
9,73±0,70
|
55,20±2,49
61,17±2,99
|
1,51±0,15 3,49±0,64
|
42,88±4,16 23,47±3,05
|
Примечание.
Uo -
минимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
Ud -
максимальная механическая прочность агрегатов эритроцитов;
t - полупериод спонтанной агрегации
эритроцитов; - индекс агрегации эритроцитов.
Таким образом, при воспалительных процессах
различной этиологии отмечается усиление агрегационной способности эритроцитов.
Однако данный показатель при воспалительных заболеваниях изучен не достаточно.
.3 Методы определения агрегационной
способности эритроцитов
.3.1 Скорость оседания эритроцитов
(СОЭ)
Одним из самых широкоизвестных и доступных
методов непрямого измерения агрегационных свойств крови является оценка
скорости седиментации эритроцитов. В настоящее время в клинико-диагностических
лабораториях применяется ручной метод определения скорости седиментации
эритроцитов в вертикальной пробирке, при котором пробирку с исследуемой пробой
помещают в аппарат Панченкова, и процесс оседания эритроцитов наблюдается
визуально, а измерение величины СОЭ проводится через ограниченный промежуток
времени - один час. Однако в своем традиционном варианте этот тест является
малоинформативным, так как не учитывает реологические характеристики крови
[16,23].
1.3.2 Оценка агрегационных свойств
крови при прямом микроскопическом наблюдении
Предложен ряд методов, основанных на прямом
микроскопическом наблюдении, в том числе наблюдение в тонком мазке крови, часто
с помощью микрофотографии. Однако данный метод позволяет охарактеризовать
агрегацию эритроцитов в основном качественно, кроме того, на результаты
исследования влияет целый ряд факторов (скорость растекания крови,
неравномерность концентрации клеток по длине мазка и др.) [14].
Биомикроскопия является прижизненным
исследованием и позволяет оценивать агрегатное состояние эритроцитов
непосредственно в кровеносном русле. Основным преимуществом этого метода
является его высокая чувствительность и информативность при нарушениях
микроциркуляции. Как уже было сказано выше феномен внутрисосудистой агрегации
эритроцитов имеет определенное диагностическое и прогностическое значение,
поскольку связан с изменениями соотношения белковых фракций плазмы,
фибриногена, липидов, нарушениями кровотока в микрососудах, электрического
потенциала эритроцитов, появлениям в крови токсических веществ, метаболитов,
непосредственно вызывающих агрегацию эритроцитов. Установлено, что агрегация
эритроцитов в различных участках кровотока и в органах, особенно при патологии,
выражена неодинаково и может иметь как местное, так и генерализованное
распространение в организме. Одним из способов реализации таких исследований
является применение микрофотографии и телевизионных систем анализа изображений.
Наряду с несомненными достоинствами этот метод обладает рядом недостатков, к
которым относятся незначительное число исследуемых структур, большая
трудоемкость подсчета количества клеток и определения размеров эритроцитарных
агрегатов, а также влияние неблагоприятных условий оперативного вмешательства.
Этот метод больше относится к научно-исследовательским методам и не может быть
использован в амбулаторных условиях [23].
1.3.3 Фотометрические методы оценки
агрегационных свойств крови
Фотометрический метод является наиболее
распространенным методом исследования агрегационных свойств эритроцитов. С
помощью этого метода возможна количественная оценка агрегатного состояния крови
- размеров и плотности микроагрегатов эритроцитов. Кроме этого, фотометрический
анализ отличается от других методов (биомикроскопия, микрофотография) простотой
и доступностью, что объясняет его широкое применение в клинической практике
[14].
Существуют различные формы фотометрических
методов. В 1950 г. К.С. Шифриным был предложен так называемый метод малых углов
для измерения микроструктуры объектов, основанный на измерении углового
распределения света, рассеянного внутри конуса малого угла около направления
распределения основного пучка. Применение метода малых углов в практическом здравоохранении
затрудняется, в частности, из-за необходимости выполнения сложных
математических вычислений для каждого случая отдельно.
Для изучения агрегационных свойств эритроцитов
применяется метод «силлектометрии», сущность которого состоит в светорассеянии
кровью после прекращения размешивания. Внезапная остановка вызывает
дезориентацию диспергированных клеток, интенсивность прошедшего света вначале
снижается, а затем в результате агрегации начинает нарастать. На основании этих
данных вычисляют индекс скорости агрегации.
Интенсивность света, прошедшего через слой
суспензии эритроцитов, изменяется в соответствии с их агрегатным состоянием,
которое характеризуется размерами и плотностью образующихся микроагрегатов.
Этот принцип используется в фотометре для количественной автоматической
регистрации агрегации эритроцитов. При агрегации оптическая плотность
эритроцитарной взвеси снижается, что и регистрируется на агрегометре. Этот
принцип был предложен G.Born
и J. O`Brien,
его реализация на анализаторе агрегации тромбоцитов позволяет значительно
повысить чувствительность метода, что делает его пригодным для исследования
спонтанной агрегации и агрегации эритроцитов под действием низких концентраций
индукторов.
В качестве последних можно использовать
различные вещества, способные влиять на агрегационную способность эритроцитов:
адреналин, норадреналин, АДФ, тромбин, хлористый лантан (предварительно
зафиксировав исследуемые клетки в растворе глутарового альдегида), полилизин,
алциановый голубой и многие другие [1,14,23].
Глава 2. Объект и методы
исследования
агрегация эритроцит кровь
заболевание
Материалы и методы:
В исследование были включены 23 пациента в
возрасте от 10 до 70 лет с хроническими рецидивирующими воспалительными
заболеваниями. Из них 16 лиц женского и 7 лиц мужского пола.
С диагнозом рецидивирующий фурункулез - 16
больных с тяжелой степенью заболевания, с частыми рецидивами до 10 раз в год, с
различной локализацией хронических очагов инфекции (лице, шее, руках, груди,
спине). Всем больным ранее проводилось хирургическое лечение.
С диагнозом герпетическая инфекция - 3 больных
со средней степенью тяжести, частота обострений до 5 раз в год. С диагнозами
хронический синусит и хронический ларингит - 3 больных; и один больной с
диагнозов ЧДБ. Показатель СОЭ был в пределах нормы. Все больные на момент
исследования находились в состоянии ремиссии.
Контрольную группу составили 12 здоровых доноров
сопоставимого возраста со станции переливания крови.
Оценка агрегационной способности эритроцитов
проводилась фотометрическим методом. В качестве стандартного агрегирующего
агента использовался алциановый голубой в концентрации 0,2%. Для этого утром
натощак из локтевой вены в пластиковую пробирку брали 5 мл крови, которую
стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Для
приготовления клеточной суспензии эритроцитов полученную пробу отстаивали в
течение 30 минут (при 200 С), отбирали плазму, затем трижды отмывали в 10 мл
физиологического раствора. Осаждали эритроциты при центрифугировании со скоростью
1000 об/мин в течение 10 минут.
Ход измерения:
Предварительно прибор калибровали по двум
точкам. При этом светопропускание образца эритроцитарной суспензии принимали за
0%, а светопропускание индуктора в физиологическом растворе - за 100%. Для
оценки агрегации в кювету прибора последовательно вносили 380 мкл суспензии
отмытых эритроцитов, стандартизованной по оптической плотности, и магнитную
мешалку. Скорость вращения мешалки 700 оборотов в минуту. Кювету предварительно
термостатировали в течение 5 минут при 370С. На десятой секунде в кювету
добавляли 80 мкл 0,2% раствора алцианового голубого. Запись показателей
агрегации эритроцитов проводили в течение 10 минут, через каждые 30 секунд.
Для оценки агрегации эритроцитов использовали
следующие расчетные показатели:
1. V
- скорость агрегации за первые 60 секунд после добавления индуктора (%/мин.).
V = степень
агрегации на первой минуте после добавления индуктора Ч 100/ максимальная
степень агрегации.
2. MAX
- максимальная степень агрегации (%).
. Т - время, соответствующее максимальной
степени агрегации (с).
Статистическую обработку данных проводили с
использованием пакета статистических программ «Statistica
6.0».
На первом этапе работы нами проведен подбор оптимальной
концентрации индуктора агрегации эритроцитов (альциановый голубой). По данным
литературы альциановый синий является катионным красителем фталоцианиновой
группы и обладает способностью связываться с гликолипидами, гликопротеидами и
кислыми мукополисахаридами мембраны эритроцитов и тем самым вызывать их
агрегацию. В низкой концентрации алциановый голубой не повреждает клетки, не
проникает в цитоплазму, но сорбируется в количестве, пропорциональном
содержанию белков и углеводов в гликокаликсе [21]. Данный индуктор используется
для определения агрегационных свойств эритроцитов в концентрации 0,05% - 0,4%.
Мы проанализировали агрегацию эритроцитов
здоровых лиц с использованием раствора альцианового синего в концентрации от
0,05% до 0,4%. При этом выявлено дозозависимое увеличение агрегации эритроцитов
под действием данного индуктора. При концентрации 0,05% агрегация эритроцитов
практически не наблюдалась, при 0,1% - слабовыраженная агрегация, при 0,2% -
выраженная агрегация, при 0,4% - максимально выраженная агрегация эритроцитов,
уже на первой минуте наблюдалось 100% светопропускание в пробе. На рисунке 3.1.
представлены данные об изменении степени агрегации эритроцитов при различных
концентрациях альцианового голубого.
Рисунок 3.1. - Степень агрегации
эритроцитов на первой минуте, в зависимости от концентрации индуктора
(альциановый голубой).
Значения показателей агрегации
эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц при использовании в
качестве индуктора агрегации 0,2% раствор альцианового голубого представлены в
таблице 3.1.
Таблица 3.1 - Показатели агрегации
эритроцитов у обследованных пациентов и здоровых лиц
Показатели агрегации
|
Доноры (n=12)
|
Больные
хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями (n=23)
|
Хронический
рецидивирующий фурункулез (n=16)
|
V, %/мин
|
28,8±1,7
|
37,3±2,2*
|
38,8±2,8*
|
MAX, %
|
79,8±2,7
|
70,0±1,9*
|
70,4±2,4*
|
Т,
мин
|
8,3±0,3
|
8,2±0,2
|
8,0±0,2
|
Примечание. * - различия достоверны при
сравнении с группой здоровых лиц (р < 0,05). Индуктор - 0,2% раствор
алцианового голубого.
Как видно из таблицы 3.1., у больных
хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями по сравнению со
здоровыми лицами отмечается увеличение скорости агрегации эритроцитов (37,3±2,2%/мин.
- у больных, 28,8±1,7%/мин. - у здоровых, р<0,0136).
Изменение данного показателя может быть связано с нарушением структуры и
функциональных свойств мембран эритроцитов. Основным звеном конформационных
изменений эритроцитарной мембраны является активация процессов перекисного
окисления липидов (ПОЛ) и белков с накоплением высокотоксичных первичных и
вторичных продуктов обмена веществ, что влечет за собой повышение вязкости
цитозоля, особенно в примембранных слоях - гликокаликсе. Кроме того, длительное
влияние аномальных продуктов метаболизма, приводит к конформации
белково-фосфолипидного бислоя мембраны эритроцитов, уплотнению их с резким
снижением трансмембранной транспортной функции, формированием, так называемой,
жесткой мембраны. С другой стороны, под действием мембраноповреждающих агентов
(например, бактериальных токсинов) происходит образование дополнительных
каналов проницаемости - кластеров, что влечет за собой увеличение диффузии
пластических и энергетических субстратов, а также электролитов в клетку. Такие
изменения приводят к нарушению деформируемости, формы и сорбционной способности
эритроцитов, и как следствие нарушению их агрегационной способности [21]. Таким
образом, данный показатель можно считать одним из факторов нарушения
реологических свойств крови, и, в частности, при хроническом воспалении.
Интересно отметить, что показатель максимальной
степени агрегации (MAX)
имел более высокие значения в контрольной группе, чем в общей группе больных:
79,8±2,7% и 70,0±1,9% соответственно (р<0,006). По данным Акулёнка А.В. и
Козловского В.И. максимальная степень агрегации эритроцитов у здоровых лиц при
использовании в качестве индуктора альциановый синий в концентрации 0,05%
составляет в среднем 36,4±1,45%. Возможно расхождение наших данных с
результатами этих авторов связано с использованием нами более высокой
концентрации индуктора. Эти же авторы отмечают, что у лиц с артериальной
гипертензией наблюдалось увеличение агрегационной способности эритроцитов МАХ -
49,6±0,87%. В наших исследованиях показано, что при воспалительных процессах
различной этиологии максимальная степень агрегации эритроцитов ниже, чем у
здоровых лиц. В литературных источниках авторами приводятся лишь изменения
показателей обратимой агрегации эритроцитов (ОАЭ) при воспалительных заболеваниях.
Их изучение осуществлялось вибрационным фотометрическим способом. Они отмечают
увеличение максимальной механической прочности агрегатов эритроцитов (Ud, В),
индекса агрегации эритроцитов (Ja) и уменьшение значений минимальной
механической прочности агрегатов эритроцитов (Uo,
В), полупериода спонтанной агрегации эритроцитов (t,
с), что в целом согласуется с нашими данными.
Показатель времени максимальной степени
агрегации (Т) в группе больных и контроле не отличался: 8,2±0,2 мин. и 8,3±0,3
мин. соответственно.
С целью сравнения показателей агрегации
эритроцитов у больных воспалительными заболеваниями различной этиологии были
выделены и проанализированы следующие группы больных лиц: первая - больные с
хроническим рецидивирующим фурункулезом, вторая - больные с другими
воспалительными заболеваниями (герпетическая инфекция, хронический синусит,
хронический ларингит и ЧДБ).
У больных с фурункулезом обнаружены достоверные
различия показателей агрегации эритроцитов по сравнению с соответствующими
значениями у здоровых: скорость агрегации (V)
- 38,8±2,8%/мин. и 28,8±1,7%/мин. (р<0,009);
максимальная степень агрегации (МАХ) - 70,4±2,4%
и 79,8±2,7%
(р<0,015)
соответственно.
При сравнении двух отдельных групп (первая -
больные с рецидивирующим фурункулезом, вторая - больные с герпетической
инфекцией, хроническим синуситом, хроническим ларингитом и ЧДБ) статистически
достоверных различий в показателях агрегации эритроцитов выявлено не было.
Таким образом, роли этиологического фактора в нарушении агрегационных свойств
эритроцитов установлено не было.
Нами проведен анализ взаимосвязи между
показателями агрегации эритроцитов. При этом установлена статистически
достоверная обратная связь между скоростью агрегации эритроцитов и временем
максимальной степени агрегации эритроцитов (r
= -0,45, р<0,029).
Как известно одним из косвенных способов оценки
агрегации эритроцитов является определение СОЭ. Однако нами не выявлено
статистически достоверной корреляции между показателем СОЭ и показателями
агрегации эритроцитов у обследованных больных (показатель СОЭ находился в
пределах нормы). Это доказывает, что СОЭ является достаточно малоинформативным
методом для оценки агрегационных свойств эритроцитов, так как скорость
седиментации эритроцитов находится в тесной зависимости от белкового состава
плазмы крови и может указывать на наличие воспалительного процесса, но при этом
не отражает функционального состояния мембраны эритроцитов.
. У больных хроническими рецидивирующими
воспалительными заболеваниями различной этиологии по сравнению со здоровыми
лицами отмечается достоверное увеличение (р<0,0136)
скорости агрегации эритроцитов, но снижение максимальной степени агрегации
(р<0,006) под воздействием 0,2% раствора альцианового голубого.
. Достоверных различий между больными с
воспалительным процессом стафилококковой этиологии и нестафилококковой
этиологии по показателям агрегации эритроцитов не выявлено.
. Обнаружено наличие достоверной обратной
связи (r = -0,45,
р<0,029) между скоростью агрегации и временем максимальной степени агрегации.
Статистически достоверной корреляции между
показателем СОЭ и показателями агрегации эритроцитов у обследованных больных
выявлено не было.
Заключение
В ходе проведенной работы было изучено изменение
агрегационной способности эритроцитов, как одного из показателей функциональных
свойств красных клеток крови, у больных с хроническими рецидивирующими
воспалительными заболеваниями различной этиологии.
При проведении исследований была определена
оптимальная концентрация индуктора агрегации (альцианового голубого) - 0,2% для
оценки функциональных свойств эритроцитов. Нами установлено, что у больных
хроническими рецидивирующими воспалительными заболеваниями различной этиологии
по сравнению со здоровыми лицами отмечается увеличение скорости агрегации эритроцитов,
но снижение максимальной степени агрегации под воздействием 0,2% раствора
альцианового голубого; достоверных различий между больными с воспалительным
процессом стафилококковой этиологии и нестафилококковой этиологии по
показателям агрегации эритроцитов не выявлено; обнаружено наличие достоверной
обратной связи (r = -0,45,
р<0,029) между скоростью агрегации и временем максимальной степени
агрегации; статистически достоверной корреляции между показателем СОЭ и
показателями агрегации эритроцитов у обследованных больных выявлено не было.
Таким образом, нарушение
структурно-функциональных свойств эритроцитов и особенно их агрегационной
способности является одним из патогенетических механизмов развития заболеваний
и их осложнений, и в частности при хроническом воспалении. Данный процесс
требует более детального изучения при конкретном заболевании, необходимо также
определить наиболее эффективную методику для его оценки и внедрить в
практическую лабораторную диагностику, как показатель нарушения функциональных
свойств эритроцитов и реологических свойств крови.
Список использованных источников
1. Изучение агрегации эритроцитов
на лазерном агрегометре / А.А. Спасов [и др.] // Клиническая лабораторная
диагностика. - 2000. - №5. - С. 21 - 23.
2. Особенности агрегационных
свойств эритроцитов при сифилисе на фоне моно- и комбинированной терапии (с
использованием имунофана) / Е.В. Савина [ и др.] // Эпидемиология и
инфекционные болезни. - 2004. - №2. - С. 27 - 32.
. Особенности морфологической
структуры эритроцитов и их агрегационной способности у больных острым гепатитом
В и В+С на фоне опийной наркомании / К.И. Чуйкова [ и др.] // Эпидемиология и
инфекционные болезни. - 2004. - №2. - С. 32 - 36.
. Цитоархитектоника и
показатели агрегации эритроцитов у больных острым инфарктом миокарда / М.В.
Березин [и др.] // Кардиология. - 2006. - №3. - С. 25 - 29.
. Нагаева, Т.А. Нарушения
периферического звена эритрона и микрогемоциркуляции при геморрагическом
васкулите / Т.А. Нагаева // Бюллетень сибирской медицины. - 2005. - №4. - С. 43
- 49.
. Фазлыев, М.М. Исследование
структурно-метаболических свойств эритроцитов у больных системными васкулитами
/ М.М. Фазлыев, А.Ж. Гильманов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2005.
- №5. - С. 34-37.
. Новицкий, В.В. Показатели
обратимой агрегации эритроцитов периферической крови у больных с острой
пневмонией / В.В. Новицкий [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. -
2001. - №6. - С. 36 - 37.
. Минеев, В.Н. Феномен
влияния видимого света и адреналина на агрегацию эритроцитов у больных
бронхиальной астмой / В.Н. Минеев, И.И. Нестерович // Аллергология. - 2006. -
№3. - С. 13 - 15.
Похожие работы на - Функциональные свойства эритроцитов при хронических рецидивирующих воспалительных заболеваниях
|