Выделение чистых культур целлюлозолитических микроорганизмов из короедов
СОДЕРЖАНИЕ
Введение
1. Литературный
обзор
2. Экспериментальная
часть
2.1 Материалы
и методы исследования
2.2 Ход
работы
2.3 Результаты
Вывод
Список используемой
литературы
ВВЕДЕНИЕ
Короед (закорник, подкорыш) - общее название
личинок некоторых видов жуков-древоточцев, откладывающих яйца под кору пней,
поваленных или высохших на корню деревьев. Личинки безногие, имеют белое или
желтоватое цилиндрическое, иногда сплюснутое тело. Развиваясь, они проделывают
многочисленные ходы как в коре, так и в древесине.
Добывают короедов под корой на лесных вырубках,
а также при заготовке дров. Для насадки лучше отбирать мелких и средних
личинок. Хранят их обычно в коробочках с отверстиями для вентиляции, куда
засыпают немного опилок или древесной трухи. В зимнее время замороженных
короедов лучше всего поместить на балконе или в холодных сенях. Попав в тепло,
личинки оживают и начинают ползать. Весной и летом хранить короедов гораздо
сложнее.
Лучшей
насадкой считаются белые личинки жука-усача, живущие преимущественно в коре и
древесине сосны.
культура целлюлозолитический
микроорганизм короед
Целью работы является выделение чистых культур
целлюлозолитических микроорганизмов из короедов.
Задачи данного исследования:
1. Выделение чистых культур
целлюлозолитических микроорганизмов из короедов.
2. Изучение морфолого-физиологических
свойств чистых культур целлюлозолитических микроорганизмов.
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
Выделение чистой культуры бактерий
При изучении физиолого-биохимических особенностей
и цикла развития бактерий, а также для установления их видовой принадлежности
необходимо работать с чистой культурой микроорганизмов. Чистой называют такую
культуру, которая получена из одной клетки и содержит микроорганизмы одного
вида.
Выделение чистой культуры включает три этапа:
получение накопительной культуры, выделение чистой культуры, определение её
чистоты.
Для получения накопительной культуры
определённого вида бактерий сначала подбирают элективные условия среды,
обеспечивающие преимущественное развитие данных бактерий. Затем из мест
обитания, в которых преобладают представители данной группы, делают посев на
соответствующую элективную среду. При создании элективных условий необходимо
знать физиологию или четко представлять те особенности, которыми должны
обладать выделяемые микроорганизмы. При получении накопительных культур нужно
учитывать способность к спорообразованию для накопления спорообразующих
бактерий прогревают бактериальную суспензию при 75 0C
10 мин или 2-5 мин при 80 0C.
О получении накопительной культуры судят по выявлению характерных признаков
развития выделяемых микроорганизмов - помутнение среды, появление пигментации,
плёнки, осадка т. д. Помимо визуального наблюдения накопительную культуру
микроскопируют и выявляют присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма,
образование которых свойственно выделяемым микроорганизмам.
Целлюлозолитические микроорганизмы
Целлюлоза - полисахарид, являющийся главным
компонентом клеточных стенок высших растений и водорослей. Ее синтез по своим
масштабам превосходит синтез всех остальных природных соединений, так что
(наряду с крахмалом)
целлюлоза - самое распространенное на Земле органическое соединение.
В то же время химическое строение целлюлозы
таково, что делает ее материалом, инертным ко многим воздействиям. Целлюлоза -
полимер, состоящий из цепочек молекул b-D-глюкозы, соединенных
b-1,4-гликозидными связями. Цепочки в свою очередь объединены в пучки
(волокна). Волокна организованы таким образом, что гидрофильные группы
целлюлозных цепочек защищены от внешних воздействий. Волокна, кроме того,
окружены оболочкой, в состав которой входят воск и пектин. Все это придает
целлюлозным волокнам механическую прочность, делает их не растворимыми в воде и
устойчивыми к различным химическим воздействиям.
Разлагать целлюлозу в анаэробных и аэробных
условиях способны эубактерии, относящиеся к разным таксономическим группам:
отдельные представители рода Clostridium, ряд актиномицетов, миксобактерии,
некоторые бактерии рода Pseudomonas, из коринеформных бактерий представители
рода Cellulomonas, постоянные обитатели желудка жвачных животных, относящиеся к
родам Ruminicoccus, Bacteroides, Butyrivibrio и др. Единственное, что
объединяет эти организмы, - способность синтезировать ферменты, расщепляющие целлюлозу.
Ферментативное разложение целлюлозы
осуществляется с помощью целлюлазного комплекса и состоит из нескольких этапов.
Сначала эндо-b-1,4-глюканаза разрывает гликозидные связи внутри целлюлозной
цепочки, что приводит к образованию довольно крупных фрагментов со свободными
концами. Затем экзо-b-1,4-глюканаза катализирует отщепление от конца цепочки
дисахарида целлобиозы. И, наконец, последняя гидролизуется до глюкозы с помощью
b-глюкозидазы.
Ферменты, входящие в состав целлюлазного
комплекса, могут выделяться в окружающую среду или оставаться связанными с
клеточной поверхностью. В первом случае целлюлоза с помощью экзогенных глюканаз
может расщепляться до целлобиозы. Во втором случае никаких внеклеточных
целлюлаз и промежуточных продуктов расщепления целлюлозы в окружающей среде не
обнаруживается. Hа поверхности бактериальной клетки найдены сферические частицы
- центры целлюлолитической активности, получившие название целлюлосом,
состоящие из полипептидных субъединиц (комплекс целлюлазных ферментов) и углеводных
фибрилл.
Разложение целлюлозы в аэробных условиях
приводит к последующему метаболизированию глюкозы в системе катаболических
процессов с поступлением водорода (электронов) в дыхательную цепь и переносу их
на O2.
Бактериям, использующим целлюлозу, принадлежит
огромная роль в природе, так как именно им мы обязаны разложением клетчатки,
составляющей основную массу всех синтезируемых природных соединений.
Целлюлаза
ЦЕЛЛЮЛАЗЫ (целлюлолитич. ферменты), ферменты
класса гидролаз, катализирующие гидролиз 1,4-гликозидных связей в молекуле
целлюлозы с образованием набора олигосахаридов различной степени полимеризации
вплоть до мономера - глюкозы.
Различают два основных типа целлюлаз:
эндоглюканазы (1,4-глюкан-4-глюканогидролазы, эндо-1,4-глюканазы) и целлобиогидролазы
(1,4--D-глюкан-4-целлобиогидролазы, экзоцеллобиогидролазы), отличающиеся по
характеру действия на молекулы целлюлозы и, как правило, действующие совместно.
Целлюлазы первого типа гидролизуют связи в
молекуле целлюлозы и некоторых ее растворимых производных (карбоксиметил-,
гидроксиэтилцеллюлоза и др.) неупорядоченным способом, образуя набор поли- и
олигомерных фрагментов различной длины. Катализируют также реакцию
трансгликозилирования (присоединение части расщепляемой молекулы поли- или
олигосахарида к концевому невосстанавливающему ангидроглюкозному остатку др.
поли- или олигомерной молекулы субстрата). Целлюлазы второго типа гидролизуют
молекулы целлюлозы, образуя почти исключительно целлобиозу, которую они
отщепляют с невосстанавливающего конца полисахарида (n
- число звеньев цепи):
Другое отличие целлюлаз второго типа от
эндоглюканаз - незначительное снижение ими вязкости расворов карбоксиметил- или
гидроксиэтилцеллюлозы (при равной степени гидролиза полимера).
Характерное свойство двух типов целлюлаз -
наличие синергизма (взаимного усиления) при их совместном действии на
высокоупорядоченные формы целлюлозы (хлопковое волокно, микрокристаллическая
целлюлоза).
Целлюлазы обнаружены у бактерий, актиномицетов,
грибов, растений. Наличие целлюлаз у животных однозначно не доказано, однако
многие насекомые, птицы, жвачные, грызуны содержат в пищеварительных органах
микрофлору, образующую целлюлазы. Способность жвачных животных переваривать
клетчатку обусловлена присутствием в их желудке (главным образом в рубце)
симбиотичиских анаэробных микроорганизмов, выделяющих целлюлазы. Содержится в
проросшем зерне, во многих бактериях, грибах (особенно активен в домовых
грибах, развивающихся на древесине); имеется у некоторых животных, питающихся
древесиной (корабельный червь, древоточцы).
Наиболее эффективные продуценты целлюлаз -
грибы. Ферментные системы грибов содержат, как правило, множественные формы
обеих форм целлюлаз, отличающиеся молекулярной массой, изоэлектрической точкой
и содержанием ковалентно связанных углеводных остатков. Часть целлюлаз -
истинные изоферменты, кодируемые самостоятоятельно генами, другие формы
образуются при посттрансляционной модификации основных типов целлюлаз.
Наиболее изученным продуцентом целлюлаз, имеющим
важное прикладное значение, является почвенный грибок Trichoderma viride
(reesei). Он секретирует по меньшей мере 2 изофермента целлобиогидролазы с
молекулярной массой 65 и 55 тыс., рН 3,9-4,2 и 5,9-6,5, а также 2 изофермента
эндоглюканазы с рН 4,7 и 5,4. Определена первичная структура всех этих
ферментов. Оптимальное каталитическое действие целлюлаз большинства грибов
проявляется при рН 4-5.
Среди анаэробных бактерий наиболее известный
продуцент целлюлаз - Clostridium thennocellum. Структура целлюлаз этих бактерий
существенно отличается от целлюлаз грибов. Этот микроорганизм секретирует
крупные надмолекулярные образования, в составе которых обнаруживается не менее
14 различных белков, в том числе молекулы целлюлазы, - целлюлосомы (общая мол.
м. более 2 млн.). Сходные образования обнаруживаются и у некоторых др.
анаэробных бактерий, в том числе находящихся в желудке жвачных животных.
В составе целлюлосом обнаружены по крайней мере
4 изофермента целлюлаз первого типа и 1 - второго. Для всех эндоглюканаз
целлюлосомы определена первичная структура, а для одной из них - также
пространственная. Оптимальная каталитическая активность бактериальных ферментов
при рН ок. 7.
Наиболее известный ингибитор целлюлаз, в
особенности для целлюлаз второго типа - целлобиоза.
В первичную структуру многих целлюлаз входит так
называемый сорбционный домен - фрагмент полипептидной цепи, определяющий
связывание молекулы фермента с поверхностью целлюлозы. У различных целлюлаз он
локализован на С- или на N-конце молекулы и связан переходной областью с
каталитическим доменом. Последний, при протеолитическом отщеплении сорбционного
домена, способен катализировать гидролиз производных целлюлозы в растворе, но
не активен по отношению к нерастворимым субстратам.
Целлюлазы применяют в производствеве соков и вин
(для их осветления), комбикормов (для их лучшего усвоения), а также для
получения высококачественной бумаги.
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1 Материал и методы исследования
Методы стерилизации. При любой микробиологической
работе: при посевах, выделении, пересевах, сохранении чистых культур -
используются стерильные среды, стерильная посуда, стерильные инструменты, чтобы
предотвратить возможность попадания посторонней микрофлоры.
Стерилизация - один из важных и необходимых
приемов в микробиологической технике. Слово "стерилизация" в переводе
с латинского (sterilis) означает обеспложивание. В микробиологии под
стерилизацией понимают гибель всех живых микроорганизмов. В микробиологической
практике стерилизуют питательные среды, посуду, инструменты и другие
необходимые материалы, чтобы не допустить развития посторонней микрофлоры.
Посуду перед стерилизацией тщательно моют, сушат
и завертывают в бумагу для сохранения стерильности после прогревания.
Каждую пипетку заворачивают отдельно в длинные
полоски бумаги, шириной 4-5 см. В концы пипеток, которые предварительно
вставляют ватные тампоны. Обмотку начинают с противоположного конца постепенным
движением бумаги по спирали и оканчивают у конца с тампоном. Завернутые пипетки
для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов заворачивают по несколько
штук вместе или помещают в специальные металлические или картонные пеналы.
Шпатели обертывают по отдельности аналогично пипеткам, используя для обмотки
полоски бумаги большей ширины. Чашки Петри заворачивают вместе по 2-4 штуки.
Колбы, пробирки и другие сосуды закрывают ватными пробками, а сверху бумажными
салфетками.
Стерилизация посуды. Для получения стерильной
посуды используется стерилизация сухим жаром. Она производится нагреванием в
течение 2 часов при температуре 170˚С в печи Пастера или в
электросушильных шкафах (с нагревом до 200˚ С). При отсутствии сушильных
шкафов, стерилизация посуды может быть произведена на автоклаве или в духовом
шкафу плиты (побурение бумаги показывает достаточность нагрева). Вся посуда
перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта, высушена и завернута в
бумагу. Баллоны, склянки, трубки, пипетки заворачивают в бумагу поодиночке, и в
этой бумаге они сохраняются до момента использования. Чашки Петри могут быть
завернуты по 2-3 вместе. Пипетки перед стерилизацией затыкают с широкого конца
ватой и заворачивают (закатывают) в узкие, длинные ленты бумаги, начиная с
оттянутого кончика.
Пробирки должны быть закрыты ватными пробками.
Для заворачивания посуды при стерилизации и сушильном шкафу лучше пользоваться
тонкой бумагой (лимонной или папиросной), при стерилизации в автоклаве -
газетной (которая не размокает). Нельзя стерилизовать посуду, закрытую
притертыми пробками.
Для получения стерильных игл, петель при
производстве посевов, взятии материала из культур для приготовления мазков
пользуются стерилизацией прокаливанием на пламени. При этом па пламени
(спиртовки, газовой горелки) подвергают кратковременному обжиганию горлышки
пробирок, колб, пробки и т. д.
Стерилизация автоклавированием применяется,
главным образом, для стерилизации питательных сред. Этот способ основан на
прогревании насыщенным паром при давлении выше атмосферного, то есть при
температуре выше 100˚С и осуществляется в специальных аппаратах- автоклавах.
Совместное действие высоких температур и пара
обеспечивает надежность стерилизации - гибель вегетативных клеток и спор
микроорганизмов. Автоклавирование проводят при различных режимах, при
дополнительном давлении 50,100,200 кПа.
Приготовление питательных сред. При составлении
питательных сред необходимо учитывать потребность микроорганизмов в элементах
питания. По составу среды подразделяют на две группы: естественные и
синтетические.
С.Н. Виноградским в практику микробиологии
введены элективные (избирательные среды для определенных групп микроорганизмов,
обеспечивающие преимущественное развитие одного вида или группы родственных
микроорганизмов и менее пригодные или совсем не пригодные для развития других).
Зная физиологические особенности соответствующей
группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования, при которых
будут развиваться лишь представители этой группы. Применяют питательные среды
различной консистенции: плотные, жидкие, полужидкие.
Техника посева культур микроорганизмов. В
лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на твердых и жидких средах в
пробирках, колбах или в чашках Петри.
Посевом в микробиологии называется внесение
клеток микроорганизмов (посевного материала - инокулята) в стерильные среды.
Пересев - это перенос выращенной культуры
микроорганизмов на питательной среде на другую свежую питательную среду.
Посев (и пересев) микроорганизмов проводят при
соблюдении определенных правил стерильности, которые необходимо выполнять,
чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними
микроорганизмами и не загрязнять окружающую среду исследуемыми культурами
микроорганизмов.
Посев (или пересев) всегда проводят вблизи
горелки. Пробирки при взятии мазка необходимо удерживать в наклонном положении,
чтобы гарантировать стерильность культуры. Если их держать вертикально, то
возможно попадание посторонних клеток микроорганизмов.
В пламени горелки тщательно обжигают
бактериологическую петлю, держа ее в правой руке в отвесном положении. Мизинцем
правой руки вынимают из второй пробирки ватную пробку и зажимают ее между
мизинцем и ладонью, пробку первой пробирки зажимают между безымянным и средним
пальцами правой руки. Снова слегка обжигают иглу и вводят ее в пробирку с
культурой. Платиновая игла остывает очень быстро. Легким прикосновением ее к
колонии микроорганизмов берут небольшое количество микробной массы и переносят
во вторую пробирку.
Окраска клеток микроорганизмов по Граму. Метод
дифференциации микробных клеток, основанный на различии в химическом составе
клеточных оболочек. Сущность его в том, что в клетках одних видов
микроорганизмов образуется нерастворимое в спирте соединение йода с основным
красителем, у других видов это соединение временно появляется временно и после
обработки спиртом растворяется. Микробы первой группы называются
грамположительными, второй - грамотрицательными.
Техника окраски по Граму. На хорошо обезжиренное
стекло наносят три тонких мазка разных культур микроорганизмов (два из них -
контрольные с заведомо известным отношением к окраске по Граму). Мазки
высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение
1мин феноловым раствором генциана фиолетового (или кристаллического
фиолетового), держа стекло в несколько наклоненном положении. Препарат, не
промывая водой, обрабатывают, непрерывно покачивая ,96% -ным спиртом в течение
15-20 с. Время обесцвечивания очень существенно, при превышении указанного
срока обесцвечиваются и грамположительные клетки, при недостаточном сроке
обработки препарат окажется перекрашенным.
Промыв препарат водой, его окрашивают фуксином
Пфейфера в течение 1мин. После этой обработки грамположительные микроорганизмы
окрашиваются в темно - фиолетовый цвет, грамотрицательные имеют только цвет
дополнительной окраски.
Выделение каталазы. Проводят на предметном
стекле в капле 5% перекиси водорода. Стерильной бактериологической петлей
вносят исследуемую культуру и тщательно перемешивают. При наличии каталазы
происходит разложение перекиси водорода с выделением пузырьков кислорода.
Проба на сероводород. Полоску фильтров бумаги
пропитывают раствором уксуснокислого свинца, высушивают и помещают в пробирку,
укрепив ватной пробкой. В присутствии сероводорода полоска бумаги через
несколько дней чернеет. Образование на поверхности почерневшей бумаги
серебристого налета свидетельствуют о выделении и других соединений среды
(меркаптанов). При введении в состав питательной среды лимоннокислого или
виннокислого железа выделение сероводорода ведет к почернению всей среды.
Поверхностный
посев. Перед посевом поверхностным способом разливают расплавленную
агаризованную питательную среду в ряд стерильных чашек Петри по 15 - 20 мл в
каждую. Чашки оставляют на горизонтальной поверхности, пока среда не застынет.
Поверхность агаризованных сред перед посевом рекомендуется подсушить для
удаления конденсационной воды, например, поместив чашки в термостат на 2-3 суток
крышками вниз. В чашку Петри с подсушенной средой вносят точно измеренный
объем (0,05 или 0,1 мл) соответствующего разведения и распределяют его
стеклянным шпателем по поверхности среды. Высевы на плотную поверхность
проводят, как правило, из трех последних разведений, причем из каждого делают 2
- 4 параллельных высева. Посевы можно делать одной пипеткой, но при этом
начинать следует обязательно с большего разведения. Для каждого разведения
используют новый стерильный шпателем. После посева чашки Петри помещают в
термостат крышками вниз. Среды Гисса
(Пестрый ряд). Гисс - разновидность дифференциальных сред, предназначенных для
изучения сахаролитических свойств микроорганизмов. Состав: пептонная вода или
бульон, углевод (сахар или многоатомный спирт), индикатор рН. В пробирки с
глюкозой помещают "поплавок", что позволяет определить глубину
расщепления: - кислота, КГ - кислота и газ. В качестве основы может
использоваться полужидкий агар.
Среда Гетчинсона (г/л): NaNO3
-
2,5; FeCl3
-
0,01; K2HPO4
- 1; MgSO4*7H2O
- 0,3; NaCl - 0,1; CaCl2
-
0,1; pH среды
доводят до 7,2, добавлением 20% - го раствора Na2CO3;
дистиллированная вода; МПА.
.2 Ход работы
Субстрат: КОРОЕД.
1. Исследуемые короеды растираем в ступке
пестиком со стерильным песком, затем добавляем дистиллированной воды,
размешиваем до образования однородной массы. И делаем посев на жидкую среду
Гетчинсона в три колбы на 250 мл. Питательной средой является фильтровальная
бумага, сложенная в форме конуса. Опускаем бумагу в колбу конусом вниз. Далее
ставим в термостат при 37 0С .
2. После того как начнется разложение
фильтровальной бумаги микроскопируем, для того чтобы определить какие выросли
микроорганизмы.
. Чтобы выделить чистую культуру
микроорганизмов, делаем пересев на плотную среду Гетчинсона с МПА с помощью
поверхностного посева из накопительной культуры. В качестве питательной среды -
полоски фильтровальной бумаги. Затем ставим в термостат при 37 0С.
. О получении чистой культуры судят по
выявлению характерных признаков развития выделяемых микроорганизмов. Помимо
визуального наблюдения накопительную культуру микроскопируют и выявляют
присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма, образование которых
свойственно выделяемым микроорганизмам.
. Выявление каталазы. Проводят на
предметном стекле в капле 5% перекиси водорода. Стерильной бактериологической
петлей вносят исследуемую культуру и тщательно перемешивают. При наличии
каталазы происходит разложение перекиси водорода с выделением пузырьков
кислорода.
. Изучение морфолого-физиологических
свойств:
a) Изучение усвоения углеводов. Посев на
среду Гисса.
b) Проба на аммиак: Процессы разложения
азотсодержащих соединений с выделением аммиака называются аммонификацией.
Аммонификация имеет важное значение для питания растения, круговорота азота в
природе. Процесс этот осуществляется бактериями в аэробных и анаэробных
условиях. Выделяющийся в атмосферу аммиак окрашивает подвешенную влажную
красную лакмусовую бумагу в синий цвет.) Проба на сероводород: Полоску
фильтров бумаги пропитывают раствором уксуснокислого свинца, высушивают и
помещают в пробирку, укрепив ватной пробкой. В присутствии сероводорода полоска
бумаги через несколько дней чернеет. Образование на поверхности почерневшей
бумаги серебристого налета свидетельствуют о выделении и других соединений
среды (меркаптанов). При введении в состав питательной среды лимоннокислого или
виннокислого железа выделение сероводорода ведет к почернению всей среды.
7. Выявление антагонистической
активности:. Проба на антибиотики: В чашку Петри разливаем среду
Гетчинсона с МПА, предварительно приготовим разведение с антибиотиками.
Бензилпенициллин разводим 1:10 физ. раствором. В приготовленном растворе
пропитываем кружки фильтровальной бумаги антибиотиком. Чистую культуру целлюлозолитических
микроорганизмов добавляем в чашку Петри и зигзагообразными движениями проводим
на среде вертикально и горизонтально. Затем берем кружок фильтровальной бумаги
и помещаем в чашку Петри. Ставим в термостат при 37 0С.
b. Проба с E.
Colli: В чашку Петри с
подсушенной средой Гетчинсона с МПА вносят точно измеренный объем (0,05 или 0,1
мл) соответствующего разведения целлюлозолитических микроорганизмов и
распределяют его стеклянным шпателем по поверхности среды. Затем распределяем E.
Colli вертикальными и
горизонтальными линиями в форме сетки. Ставим в термостат при 370С.
.3 Результаты
По выявлению характерных признаков развития
выделяемых микроорганизмов - помутнение среды, появление пигментации,
разложение фильтровальной бумаги можем сделать вывод, что присутствуют
целлюлозолитические микроорганизмы. Помимо визуального наблюдения
микроскопируют и выявляют присутствие желаемых форм, или продуктов метаболизма,
образование которых свойственно выделяемым микроорганизмам.
Результаты
микроскопирования целлюлозолитических бактерий на рис. 1.
Форма бактерий палочковидная, они располагаются
одиночно, парами или короткими цепочками, клетки неподвижны, форма концов
клетки заостренная относятся к миксобактериям (подпорядок Cystobacterinae).
Определенное расположение клеток относительно друг друга обусловлено
направлением деления и прочностью связи между разделившимися клетками. Окраска
по Грамму показала, что бактерии грамположительные, так как приобрели
сине-фиолетовое окрашивание. Размеры бактерий 2 мкм.
Выявление каталазы: каталаза присутствует, так
как произошло разложение перекиси водорода с выделением пузырьков кислорода.
Изучение морфолого - физиологических свойств:
a) Результат посева на среде Гисса: Во
всех колбах с разновидными дифференциальными средами, предназначенные для
изучения сахаролитических свойств микроорганизмов изменились цвета (бежевый),
что свидетельствует об усвояемости сахарозы, сорбита, лактозы, глюкозы,
мальтазы, маннита целлюлолитическими микроорганизмами;
b) Результат пробы на аммиак: аммиак
отсутствует, так как не окрасилась красная лакмусовая бумага в синий цвет;) Результат
пробы на сероводород: сероводород отсутствует, потому что полоска бумаги не
почернела.
Выявление антагонистической активности:
a) Проба на антибиотики. В результате
микроскопирования можно сделать вывод, что целлюлозолитические бактерии не
подавились антибиотиком (бензилпенициллином), т.е. они устойчивы по отношению к
антибиотику. Так как целлюлозолитические микроорганизмы образовали капсулы.
b) Проба с E.
Colli. В результате
микроскопирования целлюлозолитических микроорганизмов с E.
Colli наблюдали, что
целлюлозолитические бактерии подавили E.
Colli, т.е. выросли
только целлюлозолитические микроорганизмы.
ВЫВОД
1) Выделили чистую культуру
целлюлозолитических микроорганизмов из короедов.
2) При изучении морфолого -
физиологических свойств выделены следующие выводы:
· Изучение усвоения углеводов. Посев на среду
Гисса. Усваиваются сорбит, сахароза, маннит, лактоза, мальтаза, глюкоза.
· Проба на аммиак отсутствует.
· Проба на сероводород отсутствует.
3) На выявление антагонистической
активности выведен вывод, что зоны подавления роста антибиотика не наблюдается
вследствие образования капсул.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Гусев М.В., Минеева Л.А.
Микробиология. М.: Издательский центр "Академия", 2003.
2. Градова Н.Б., Бабусенко
Е.С., Горнова И.Б., Гусарова Н.А. Лабораторный практикум по общей
микробиологии. Москва, Дели принт, 2001.
. Егорова Н.С. Руководство к
практическим занятиям по микробиологии/Учебное пособие. Москва, МГУ, 1995.
. Теппер Е.З., Шильникова
В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. Москва, агропромиздат, 1987.
. Тимофеева В.А.
"Товароведение продовольственных товаров", Ростов-на-Дону, Феникс, 2007
год.
. Шепелев А.Ф.
"Товароведение и экспертиза молока и молочных продуктов", Ростов - на
- Дону, 2003 год.