), угнетение, обильное серозно-слизистое истечение из носа, пенистое слюнотечение. По мере развития болезни на слизистой оболочке носа появляются мелкие очаги некроза, поверхностные язвы. Истечения из носовой полости становятся фибринозно-гнойными, выдыхаемый воздух зловонным. Дыхание у животных учащенное, поверхностное, ярко выражена одышка; отмечают сухой кашель, вначале короткий, а затем громкий, лающий. Ухудшается или полностью исчезает аппетит, наступает истощение, прогрессирует упадок сил, больные животные лежат. Продолжительность болезни 7-10 дн. Отмечают частые случаи осложнения патогенной микрофлорой, следствием чего является бронхопневмония.
Хроническое течение инфекционного ринотрахеита обычно наблюдают в конце эпизоотии, как следствие перехода острых и подострых случаев болезни. Заболевание может продолжаться до 1,5 мес, нередко осложняясь секундарной инфекцией.
Генитальная форма. Инкубационный период при передаче вируса во время случки составляет от 3 до 12 дней. Отмечают кратковременное повышение температуры тела, уменьшение аппетита, снижение лактации, частое мочеиспускание. Слизистая оболочка вульвы и преддверия влагалища отечна, гиперемирована, покрыта светло- и темно-красными узелками величиной с булавочную головку, которые окружены алой зоной. В последующем развиваются везикулы, пустулы, дифтеритические пленки, после отторжения которых образуются язвы. Спина изогнута, из влагалища выделяется слизисто-гнойный экссудат. Через 2-3 недели наступает улучшение общего состояния и выздоровление. У беременных коров часто бывают аборты, сопровождающиеся метритами и задержанием последа. Вульвовагиниты могут протекать и субклинически. Латентное инфицирование обусловливает возможность выделения вируса из влагалища до 570 дней.
У быков инкубационный период составляет 40-72 ч. Болезнь проявляется лихорадкой (40-41,5°), угнетением, снижением__аппетита. неспособностью к спариванию На месте перехода складки слизистой оболочки с головки пениса на препуции, а также на слизистой оболочке препуциалького мешка обнаруживают мелкие розовые узелки, которые на 4-5-й день лопаются, образуют язвы и эрозии, из препуция выделяется гной. На 6-8-п день начинается заживление язв и эрозий без рубцов и к 12-14-му дню животные выздоравливают. Бывают случаи субклинического бессимптомного переболевакия быков, сопровождающиеся выделением вируса со спермой до 626 дн.
Патологоанатомические изменения. При респираторной форме болезни устанавливают катаральное воспаление и отек слизистой оболочки носовой полости, гортани, трахеи, скопление серозного или гнойного экссудатов в носовых ходах и трахее. Иногда на слизистой оболочке носа обнаруживают очаги некроза, кровоизлияния, серозно-фибринозные пленки. Конъюнктива отечна, гиперемирована. Легкие увеличены в объеме, просветы бронхов и альвеол заполнены пенистой жидкостью или слизисто-гнойным экссудатом. В случаях, когда инфекционный ринотрахеит осложняется секундарной микрофлорой, на слизистой носовой полости и трахеи выявляют очаги некроза, дифтеритические наложения, эмфизему легких, катарально-гнойную бронхопневмонию.
При генитальной форме выявляют гиперемию слизистых оболочек преддверия и вагины у коров, препуция и пениса у быков, появление на них кровоизлияний, пустул, а в более поздние сроки - эрозий и язв. Иногда обнаруживают некротические очаги слизистой оболочки, покрытые дифтеритической пленкой.
Диагноз устанавливают на основании клинико-эпизоотологических данных, патологоанатомических изменений, а также результатов лабораторных исследований.
Для исследований от больных животных в период максимального проявления у них клинических признаков в лабораторию направляют истечения, соскобы и смывы из носовой полости, влагалища, препуция. Одновременно от них для серологического исследования отбирают первую пробу крови (вторую - через 25-30 дн). От павших и вынужденно убитых животных не позднее чем через 2 ч после гибели берут небольшие кусочки слизистой оболочки носа, гортани, трахеи, а также легких, головного мозга, пораженных участков желудочно-кишечного тракта, органы абортивного плода, которые помещают в стерильные флаконы и доставляют в лабораторию в термосе со льдом.
Лабораторные исследования предусматривают обнаружение в патологическом материале вирусного антигена методом иммунофлюоресценции, выделение возбудителя и его идентификацию в РН и РИФ, выявление антител в крови переболевших животных (серологическая диагностика) в РНГА и РН.
Обнаружение вирусного антигена ИФ методом. Со слизистой оболочки носовой перегородки, бронхов, трахеи, влагалища делают скальпелем соскобы, вносят их в центрифужные пробирки с 5 мл физиологического раствора и центрифугируют 10 мин при 2000 об./мин. Осадок клеток суспензируют в 0,5 мл того же раствора и на обезжиренных предметных стеклах готовят по 4 мазка из каждого исследуемого препарата. Одновременно готовят по 4 препарата-отпечатка или гистосреза из кусочков легких, головного мозга, органов абортированного плода. Препараты подсушивают на воздухе, фиксируют 5 мин в ацетоне, окрашивают флюоресцирующими сыворотками во влажной камере при 37°С в течение 45 мин. Затем их ополаскивают в трех сменах физиологического раствора (рН 7,2- 7,4) и в дистиллированной воде, подсушивают на воздухе, исследуют под люминесцентным микроскопом.
В положительных случаях в ядре на тусклом зеленовато-сером фоне ткани выявляют яркое зеленовато-желтое диффузное или в виде гранул свечение вирусного антигена.
Для контроля специфичности свечения ставят реакцию подавления иммунофлюоресценции. Для этого на два препарата из органа, при исследовании которого получена положительная реакция иммунофлюоресценции, наносят специфическую сыворотку в разведении 1:10 и выдерживают в термостате во влажной камере 30 мин.
В контрольных препаратах, обработанных последовательно специфической и флюоресцирующей сыворотками, специфическое свечение отсутствует.
Выделение вируса в культуре клеток. Флаконы со смывами, а также со слизью и соскобами, ресуспензированными в растворе Хэнкса с антибиотиками, центрифугируют 10 мин при 2 тыс. об/мин, надосадочную жидкость отсасывают в стерильную посуду, куда вносят по 500 ЕД/мл пенициллина и 500 мкг/мл стрептомицина, выдерживают 2-4 ч при 4°С и используют для заражения культур клеток.
Из кусочков слизистой оболочки носовой полости, трахеи, бронхов, а также легких и головного мозга готовят 10%-ную суспензию на растворе Хэнкса с антибиотиками, центрифугируют 20 мин при 5 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают, выдерживают 2-4 ч при 4°С и используют для заражения культур клеток.
Вируссодержащим материалом заражают по 5 первично-трипсинизированных культур клеток почек или селезенки эмбриона коровы, почек теленка, тестикулов бычков. Пробирки с монослоем клеток отмывают раствором Хэнкса, вносят по 0,1-0,2 мл каждого исследуемого материала, выдерживают 60-90 мин при 37°С в термостате. Затем вируссодержащий материал удаляют, добавляют 1 мл поддерживающей среды, содержащей 200 ЕД/мл пенициллина и 200 мкг/мл стрептомицина, ставят на инкубацию при 37°С. Контролем служат 4 пробирки с незараженными культурами клеток, в которых ростовую среду заменяют поддерживающей. Просмотр пробирок начинают со 2-го дня и проводят 7-^14 сут - до обнаружения ЦПД, которое проявляется обычно через 36-48 ч.
При цитологическом исследовании инфицированной культуры клеток, окрашенной гематоксилин-эозином, обнаруживают внутриядерные тельца-включения.
Видовую принадлежность вируса устанавливают при наличии разности в титрах вируса с отрицательной и положительной сыворотками не менее чем на 2 логарифма.
Серологическая диагностика основывается на постановке РН и РНГА. Для исследования используют парные сыворотки крови, взятые в первые 2-3 сут болезни, а затем через 14-30 дн. Перед исследованием сыворотки прогревают 30 мин при 56°С.
Постановка и учет РН. Готовят двукратные разведения испытуемых сывороток от 1:2 до 1:64 на питательной среде для культур клеток в объеме 0,5 мл.
Имеющийся в диагностическом наборе вирус предварительно титруют в культуре клеток. Для этого сухой антиген (вирус) разводят десятикратно от 10~' до 10~10 (конечный титр сухого антигена указан на этикетке) питательной средой. Каждым разведением с вируса в объеме 1 мл заражают по 4 пробирки с культурой клеток, отмытой раствором Хэнкса. Культуры клеток инкубируют при 37°С, ежедневно просматривают в течение 5-7 сут. Титром вируса считают его наибольшее разведение, вызывающее ЦПД в 50% культур клеток. Вычисляют титр по Риду-Менчу и выражают в ТЦД so/мл. Затем готовят необходимый объем вируса, содержащего 100 ТЦДзч в 0,1 мл, и добавляют равный объем его (0,5мл) в каждую пробирку с разведением сывороток. Смесь вируса и сыворотки выдерживают 1 ч при 37°С, вносят каждую в объеме 0,2 мл в 4 пробирки с культурой клеток, куда добавляют 0,8 мл поддерживающей среды. Инкубируют в термостате при 37°. Контролем служат 4 пробирки с незараженной культурой клеток, 4 пробирки, зараженные 0,2 мл вируса, содержащего 100 ТЦДго в 6,1 мл.
Титром сыворотки считают то ее предельное разведение, которое предотвратило ЦПД в 50% зараженных культур клеток.
Положительный диагноз при инфекционном ринотрахеите устанавливают при 4-кратном и большем увеличении титра сывороток во второй пробе в сравнении с первой.
Постановка и учет РНГА. Исследуемые и контрольную (отрицательную) сыворотки разводят двукратно в объеме 0,2 мл. Для разведения используют физиологический раствор (рН 7,2-7,4), к которому добавляют 1% нормальной сыворотки кролика, истощенной эритроцитами барана, или 0,25% бычьего альбумина. К каждому разведению сыворотки добавляют по 0,05 мл эритроцитариого диагностикума. Смесь сыворотки и эритроцитарного диагностикума осторожно перемешивают, оставляют при комнатной температуре на 1-2 ч. Титром сыворотки считают то ее наибольшее разведение, которое вызвало агглютинацию диагностикума. В ряду с контрольной отрицательной сывороткой агглютинация должна отсутствовать.
Таким образом, диагноз на ИРТ считается установленным:
при выделении и идентификации вируса в патологическом материале;
при нарастании в 4 и более раз титров специфических антител.
Дифференциальный диагноз. Инфекционный ринотрахеит необходимо отличать от парагриппа-3, вирусной диареи, ящура, злокачественной катаральной горячки, пастереллеза.
Парагрипп-3 возникает после стрессовых ситуаций (переохлаждение, транспортировка), сопровождается поражением легких. Вирус образует не только внутриядерные, но и цитоплазматические включения, содержит ге-магглютинин. Лабораторный диагноз устанавливают по РГА, РГАд, РТГА, РТГАд, РН. Вирусная диарея характеризуется преимущественным поражением пищеварительного тракта; окончательный диагноз устанавливают по РН со специфической сывороткой в культуре клеток. Ящур отличается большой контагиозностью, более быстрым распространением инфекции, меньшей летальностью. Для болезни характерным является образование специфических афт в ротовой полости, в области вымени, венчика. Ящур диагностируют по РСК. Злокачественная катаральная горячка сопровождается поражением роговицы глаз (помутнение, изъязвление), расстройством нервной системы, наличием цитоплазматических включений в мозговой ткани. Пастереллез проявляется септицемией, явлениями геморрагического диатеза, обширными отеками подкожной и межмышечной клетчатки. При бактериологическом исследовании выделяют грамотрица-тельные биполярные бактерии.
Лечение. Больных животных лечат гипериммунной сывороткой или сывороткой реконвалесцентов. Препараты применяют аэрозольно из расчета 10 мл/м3 помещения, добавляя к ним 10% стерильного медицинского глицерина, или подкожно в дозе 2 мл/кг. Используют также аэрозоли тимола (к спиртовому раствору тимола 1:16 добавляют равное количество глицерина и распыляют на САГ-1 по 1 ч в течение трех дней подряд), аэрозоли 40%-ного раствора молочной кислоты (распыляют на 1 мл/м5 помещения по 1 ч в течение трех дней подряд), аэрозоли йода (1 г кристаллического йода, 0,09 алюминиевой пудры, 0,13 г хлористого аммония, несколько капель воды на 1 м3 помещения, применяют по 1 ч в течение 4-5 дн). Проводят ингаляцию хлорскипидаром (смешивание 2 г хлорной извести, содержащей не менее 25% активного хлора, и 0,02 г скипидара на 1 м3 помещения), используют отхаркивающие и общеукрепляющие средства (натрий гидрокарбонат внутрь по 20-25 г на 100 кг живой массы в течение 8-10 дн, глюкоза, хлористый кальций, витамины и др.). При осложнении секундарной инфекцией используют антибиотики пролонгированного действия, сульфаниламидные и нитрофурановые препараты.
Иммунитет и специфическая профилактика. У переболевших животных иммунитет длится 1,5-2 года, при респираторной форме он более напряженный и продолжительный, нежели при генитальной. Из средств специфической профилактики применяют живую вирус-вакцину ВИЭВ против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, инактивированную вакцину против инфекционного ринотрахеита, а также сухую культуральную ассоциированную вакцину против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
Вирус-вакцину ВИЭВ против инфекционного ринотрахеита применяют для профилактической и вынужденной иммунизации крупного рогатого скота в хозяйствах, неблагополучных по инфекционному ринотрахеиту. Вакцинации подлежат клинически здоровые животные. Не разрешается прививать слабых животных и больных другими болезнями, а также стельных коров после 4-го месяца стельности.
Сухую живую вакцину перед применением растворяют стерильным физиологическим раствором в объеме, зависящем от титра вакцины. Используют не позднее 2 ч после растворения, а в теплое время не позднее 30 мин, предохраняя ее от действия солнечных лучей. Неиспользованную вакцину уничтожают посредством 15-минутного кипячения.
Вакцину вводят в следующих дозах: молодняку в возрасте от 10 дн до 4 мес - по 2 мл двукратно - первый раз - интраназально по 1 мл в каждый носовой ход, второй раз - подкожно через 14 дней в дозе 2 мл, животным старше 4 мес. -3 мл однократно, подкожно в области верхней трети шеи._
"Первую (интраназальную) вакцинацию телят проводят в хозяйствах-поставщиках за 2-3 дн до перевода или в первые 2 дн после перевода на откорм или доращивание. Для интраназальной аппликации вакцины используют аэрозольные распылители, автоматические шприцы с аэрозольной насадкой. Вакцину в носовые ходы можно ввести с помощью шприца с надетой на него резиновой трубкой длиной 5-7 см.
Иммунитет у привитых животных наступает на 5-7-й день после вакцинации и сохраняется не менее 1 г.
У отдельных животных после вакцинации возможно кратковременное (12-24 ч) повышение температуры тела и признаки слабого серозного ринита, без нарушений в общем состоянии организма.
Применяют для профилактической иммунизации крупного рогатого скота в хозяйствах репродукторного и племенного направления. Прививают только клинически здоровых животных.
В хозяйствах, благополучных и угрожаемых по инфекционному ринотрахеиту крупного рогатого скота, животных вакцинируют внутримышечно, двукратно с интервалом 30 дн: молодняк до 6-месячного возраста по 5 мл, всем остальных животных - по 10 мл. Стельных коров иммунизируют в последние 3 мес стельности 2-кратно с интервалом 30 дн. Телят от вакцинированных коров прививают 2:кратно с интервалом 30 дней, начиная с 3-месячного возраста. Телят, родившихся от неиммунизированных коров, а также с неизвестным иммунологическим фоном, прививают в 6-недельном возрасте и повторно через 30 дн.
При вспышке инфекционного ринотрахеита животных всех возрастов вакцинируют внутримышечно 2-кратно с интервалом 14 дн.
После вакцинации у части животных может повышаться температура тела и удерживаться 48-72 ч.
Иммунитет у вакцинированных животных наступает через 14 дн после второй прививки и сохраняется не менее 6 мес. Вакцинированных животных можно вывозить в другие хозяйства через 14 дн после второй прививки.
Вакцину против парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота вводят телятам в возрасте до 3-х мес.. 2-кратно - первый раз интраназально по 1 мл в каждый носовой ход, второй раз через 14 дн подкожно в средней трети шеи в дозе 2 мл, молодняку старше 3 мес - интраназально по 1 мл в каждый носовой ход, повторно через 14 дн, подкожно в дозе 3 мл. Иммунитет формируется через 2 недели после вакцинации, длится не менее 6 мес после повторной иммунизации. Убой привитых животных разрешается через 7 дн после вакцинации.
Вакцину применяют в неблагополучных хозяйствах для профилактики ПГ-3 и ИРТ.
В животноводческих комплексах откормочного типа телят с 20-дневного возраста вакцинируют в первые 2 дн после поступления в хозяйство по группам, разрешая перемещения животных не ранее чем через 2 недели со дня повторной вакцинации.
В хозяйствах репродукторного типа вакцину применяют в случае вспышки болезни. При этом вынужденно вакцинируют всех животных, находящихся под угрозой заражения. Вакцинации подлежат клинически здоровые животные. Слабых животных и больных другими болезнями изолируют, подвергают лечению и прививают после их выздоровления. Первая вакцинация может вызвать у некоторых животных кратковременное повышение температуры тела и слабые серозные истечения из носа, повторное введение у отдельных вакцинированных животных может вызвать незначительное кратковременное повышение температуры тела.
Профилактика и меры борьбы. В основу профилактики ИРТ положено строгое соблюдение ветеринарных требований по охране хозяйств от заноса возбудителя инфекции, проведение комплекса мер, направленных на повышение резистентное организма, своевременную диагностику, выделение и изоляцию больных животных, обезвреживание вируса во внешней среде.
Для охраны хозяйств от заноса возбудителя инфекции необходимо комплектовать их здоровыми животными из закрепленных репродукторных ферм, благополучных по инфекционным болезням, с соблюдением принципа пусто - занято. Помещения необходимо заполнять одновозрастными животными в течение 3 - 5 дн, размещать в секциях телят только одного хозяйства-поставщика, содержать их одной группой до перевода в группу следующего периода выращивания (откорма) или сдачи на убой; доукомплектование запрещается. В течение 30 дн вновь поступившие животные должны находиться в карантине. Необходимо строго выполнять требования работы предприятий закрытого типа, поддерживать в помещениях нормальный микроклимат, регулярно проводить профилактическую аэрозольную дезинфекцию воздуха, механическую очистку стен, перегородок, полов и кормушек с их последующей дезинфекцией.
При подозрении на заболевание животных ИРТ проводят их клинический осмотр, выявляют и изолируют больных, отбирают от них патологический материал и направляют в лабораторию для диагностического исследования.
При установлении диагноза хозяйство объявляют неблагополучным по этой болезни и вводят ограничения: запрещают ввод в хозяйство и вывод из него животных, перегруппировку их внутри хозяйства, вывоз фуража и предметов ухода, закрепляют для ухода за животными отдельный обслуживающий персонал и др.
Больных животных изолируют и лечат. Всех остальных животных, находящихся в новом эпизоотическом очаге, немедленно вакцинируют сухой вирусвакциной против инфекционного ринотрахеита согласно наставлению по ее применению. В стационарно неблагополучных хозяйствах мясного, направления всех подозрительных по заболеванию и подозреваемых в заражении животных вакцинируют сухой вирусвакциной против ИРТ.
В хозяйствах молочного направления всех животных, находящихся в новом эпизоотическом очаге и иммунизированных сухой вирус-вакциной, через 25-30 дн подвергают 2-кратной вакцинации инактивированной вакциной согласно наставлению по ее применению. Больных животных лечат.
В угрожаемой зоне животных прививают инактивированной вакциной.
Помещения, где содержатся больные и подозрительные по заболеванию животные, а также предметы ухода, спецодежду, подстилку и навоз обеззараживают.
Для дезинфекции применяют: 1%-ный раствор формальдегида; 4%-ный горячий раствор ниртана; 5%-ный раствор хлорамина-Б; раствор гипохлорита натрия с содержанием 1,5% активного хлора; осветленный раствор хлорной извести с содержанием 2% активного хлора при экспозиции 3 ч; 2%-ный горячий раствор едкого натрия при экспозиции 4 ч; 3%-ный раствор ниртана, подогретый до 50°С, при экспозиции 5 ч. Расход растворов 1 л/м2.
Дезинфекцию можно проводить и аэрозольным методом, используя формалин из расчета 20 мл/м3 при экспозиции 12 ч, 25%-ный раствор глутарового альдегида из расчета 25 мл/м3 при экспозиции 24 ч.
Дезинфекцию проводят также посредством направленного нанесения потока аэрозоля на поверхность помещения, используя раствор гипохлорита натрия с содержанием 1,5% активного хлора или 3%-ный раствор надуксусной кислоты, приготовленный согласно наставлению по применению. Вышеуказанные растворы расходуют из расчета 200 мл/м2 при экспозиции 3 ч.
Молоко от больных и подозрительных по заболеванию животных после пастеризации при 70°С в течение 30 мин используют в пищу людям и в корм животным.
Хозяйство объявляют благополучным и снимают с него отграничения через 30 дн после последнего случая выздоровления больного животного и проведения заключительной дезинфекции.
инфекционный ринотрахеит